[发明专利]一种海水养殖环境中异养硝化脱硫细菌的筛选方法

摘要

本发明涉及一种海水养殖环境中异养硝化脱硫细菌的筛选方法，包括：（1）海水养殖环境中异养细菌的分离、纯化；（2）通过氨氧化培养基进行异养硝化细菌硝化活性的复核；（3）挑选硝化活性强的菌株作为筛选脱硫细菌的供试菌株；（4）通过含Na2S培养基进行脱硫细菌的初筛；（5）选择脱硫效果好的菌株，进行液体环境中同步去除铵态氮和硫化物能力的验证试验。本发明操作简单，效果直观可靠，所分离菌株可以利用铵态氮为唯一氮源的培养基进行生长，并且可以耐受高盐度的海水养殖环境，对养殖水体中的铵态氮乃至养殖水体和沉积物中的硫化物具有良好的去除效果。

主权项

一种海水养殖环境中异养硝化脱硫细菌的筛选方法，包括：（1）配制分离异养硝化细菌用培养基，于121℃下灭菌15‑20分钟，待培养基冷却至45～50℃后倾倒至灭菌的培养皿中，静置冷凝成平板；将海水养殖环境中水样或者沉积物样品与无菌海水混合得到稀释液或均匀悬浊液；将稀释液或均匀悬浊液再与无菌海水按体积比1:9进行梯度稀释，稀释6‑7次，得到不同浓度的稀释液；将每一浓度的稀释样品在上述平板上摊开，干燥，静置冷凝后，30℃下培养3‑4天；在形成菌落的平板上，挑取单个菌落按照上述方法再重复2‑3次，即可得到经分离纯化后的异养菌株；（2）在步骤（1）中得到的平板上以点接种方式接种上述异养菌株，30℃下培养3‑4天后，形成单菌落后，用格利斯试剂点滴于菌落上，挑取菌落周边红色深的，作为硝化能力复核用的供试菌株；（3）将由步骤（2）筛选出的供试菌株用接种环挑取一菌环菌苔接种于含唯一碳源的复核用培养基，30℃下培养7‑10天，培养期间每隔3天取培养液至洁净试管，将格利斯试剂点滴入试管中进行硝化活性确认，并以不接菌株的培养基作为空白对照，同样选择红色深的菌株作为脱硫细菌筛选用的供试菌株；（4）将由步骤（3）筛选出的供试菌株用接种环挑取一菌环菌苔接种于脱硫细菌筛选用培养基中，30℃下培养，并同时做不接菌株的空白对照；用碘量法测定培养液中硫化物含量，选择硫化物含量明显降低的菌株作为同步去除铵态氮和硫化物能力测试用的供试菌株；（5）将由步骤（4）筛选出的供试菌株同样在脱硫细菌筛选用培养基中培养，培养过程中取样，用钠氏试剂比色法测定培养液中铵态氮浓度，并用碘量法测定培养液中硫化物含量，验证供试菌株的同步去除铵态氮和硫化物能力；选择去除铵态氮和硫化物效果好的，即得所需异养硝化脱硫细菌。