[发明专利]一种近红外的电致化学发光免疫检测方法

摘要

本发明公开了一种近红外的电致化学发光免疫检测方法，属于电致化学发光免疫检测技术领域；包括步骤（1）近红外量子点与二抗的连接、步骤（2）夹心免疫反应并制得电致化学发光免疫传感器和步骤（3）用电致化学发光免疫传感器进行免疫检测三个步骤；本发明步骤简单，操作性好，能够有效地避免潜在的电化学过程干扰和生物组织背景光干扰，具有较高的灵敏度和精确性，重复性好。

主权项

一种近红外的电致化学发光免疫检测方法，包括步骤（1）近红外量子点与二抗的连接、步骤（2）夹心免疫反应并制得电致化学发光免疫传感器和步骤（3）用电致化学发光免疫传感器进行免疫检测：（1）近红外量子点与二抗的连接：将表面带有羧基的量子点作为标记物并分散到含有1‑乙基‑3‑3‑二甲基氨丙基碳化二亚胺、N‑羟基琥珀酰亚胺的缓冲溶液中，加入二抗，漩涡混合震荡均匀，在室温下反应，对反应溶液进行离心，并用上述缓冲溶液洗涤2‑5次，得量子点标记的二抗；（2）夹心免疫反应：首先，将表面枝接有羧基的固体电极在含有1‑乙基‑3‑3‑二甲基氨丙基碳化二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺的缓冲溶液中活化后，取含有一抗的缓冲溶液滴加到电极表面，在30‑50℃下孵育1‑6h，将一抗固定在电极上，并采用3%体积浓度的牛血清白蛋白滴加到电极封闭非特异性吸附的活性位点；其次，取含有不同浓度待测抗原的缓冲溶液或处理过的病人血清样品滴涂到电极上，在35‑45℃下孵育1‑6h，清洗电极；最后，取量子点标记的二抗溶液滴加到上述电极上，在35‑45℃下孵育1‑6h，制得近红外电致化学发光免疫传感器；（3）用电致化学发光免疫传感器进行免疫检测：将上述近红外电致化学发光免疫传感器清洗后，在含有10‑100mmol/L2‑N‑二丁氨基乙醇或三丙胺的缓冲溶液中进行电致化学发光测试；先利用夹心免疫分析方法，测定一系列标准浓度抗原的电致化学发光信号，然后确定抗原标准工作曲线，最后利用标准曲线法测定待测样品中抗原的浓度。