[发明专利]一种海水养殖专用蛭弧菌的发酵生产工艺

摘要

本发明公开了一种海水养殖专用蛭弧菌发酵生产工艺，步骤少，操作简单，利于工业化生产。所制备的噬菌蛭弧菌产品，菌体含量高，能够达到106～108个/ml，产品的保存时间长，在一年以上，易于使用。本发明的海水养殖专用蛭弧菌的发酵生产工艺特别适用于1～5吨发酵罐的生产本发明的海水养殖专用蛭弧菌发酵生产工艺适用于1～5吨发酵罐。

主权项

一种海水养殖专用蛭弧菌的发酵生产工艺，其特征在于，包括宿主菌培养和噬菌蛭弧菌培养，其中：所述宿主菌培养，包括以下步骤：（1）一级摇瓶种子培养——将经活化处理后的宿主菌接种于盛装有培养基的一级摇瓶中，在温度33±1℃、转速180~220转/分的条件下培养18~24h，即制得一级摇瓶宿主菌种子；（2）二级摇瓶种子培养——在盛装有培养基的二级摇瓶中接入步骤（1）培养好的一级摇瓶宿主菌种子，在温度33±1℃、转速180~220转/分的条件下培养18~24h，即制得二级摇瓶种子；（3）种子罐培养——将步骤（2）培养好的二级摇瓶种子按照1%~3%的体积比接入盛装有培养基的种子罐中，在罐温37±1℃、罐压0.045~0.55 MPa、搅拌转速80~120转/分的条件下培养18~24h即制得宿主菌种子液；（4）发酵罐培养——在盛装有培养基的发酵罐中接入步骤（3）培养好的宿主菌种子液，在罐温35±1℃、罐压0.05 MPa、搅拌转速80~100转/分的条件下培养16~24h即可；宿主菌培养过程中，在向一级摇瓶、二级摇瓶、种子罐以及发酵罐的培养基接种前，盛装有相应培养基的一级摇瓶、二级摇瓶、种子罐以及发酵罐均经过灭菌处理；所述噬菌蛭弧菌培养，包括以下步骤：1）将经活化处理后的噬菌蛭弧菌接种于培养好一级摇瓶宿主菌种子的一级摇瓶中，在温度33±1℃、摇瓶转速180~220转/分的条件下培养18~24h，即制得一级摇瓶噬菌蛭弧菌；2）在培养好二级摇瓶种子的二级摇瓶中，接入步骤1）培养好的一级摇瓶噬菌蛭弧菌，在温度33±1℃、摇瓶转速180~220转/分的条件下培养18~24h，即制得二级摇瓶噬菌蛭弧菌；3）在培养好宿主菌种子液的种子罐中，按1%~5%的体积比接入步骤2）培养好的二级摇瓶噬菌蛭弧菌，在温度33±1℃、罐压0.05 MPa、搅拌转速80~100转/分的条件下培养16~24h，即制得噬菌蛭弧菌种子液；4）在已培养好宿主菌的发酵罐中，按3%~5%的体积比接入步骤3）培养好的噬菌蛭弧菌种子液，在罐温33±1℃、罐压0.05 MPa、搅拌转速80~100转/分的条件下，培养72~96h，即制得蛭弧菌菌液；一级摇瓶的培养基配方为：氯化钠0.4~0.6 g/l；酵母粉0.2~0.4 g/l；蛋白胨或胰蛋白胨0.4~0.6g/l；该培养基的pH为6.5~6.8；二级摇瓶的培养基配方为：氯化钠0.4~0.6 g/l；酵母粉0.2~0.4 g/l；蛋白胨0.4~0.6g/l；该培养基的pH为6.5~6.8；种子罐的培养基配方为：氯化钠 0.18~0.22 g/l；酵母粉0.08~0.12 g/l；蛋白胨或胰蛋白胨0.18~0.22 g/l；消泡剂 0.009~0.011 g/l；该培养基的pH为7.0~7.2；发酵罐的培养基配方为：氯化钠0.18~0.22 g/l；酵母粉0.08~0.12 g/l；蛋白胨或胰蛋白胨0.18~0.22 g/l；消泡剂0.018~0.022 g/l；该培养基的pH为6.5~6.8。