[发明专利]一种A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒及其制备方法

摘要

本发明公开了一种A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原酶联诊断试剂盒，包括由A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板、标本稀释液、酶标二抗、洗涤液、显色液、终止液构成。本发明提供试剂盒的检测结果与美国R&D试剂盒脑膜炎奈瑟菌A+C型IgM ELISA检测试剂盒的一致性高，灵敏度为98%，特异度为99.7%。

主权项

一种A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒，其特征在于：它由A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板、标本稀释液、酶标二抗、洗涤液、底物液、终止液构成，具体组份为：标本稀释液：含10%小牛血清和2%抗人IgG的0.01M、pH7.4的磷酸盐缓冲液；洗涤液：含有0.05%Tween20的磷酸盐缓冲液；酶标二抗：辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgM单抗；底物液：TMB‑H000尿素溶液；终止液：2mol/LH2S04溶液；所述A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板通过如下步骤制得：1)、在96孔酶标板的每孔内加入0.1MNaHC03稀释的5%戊二醛200uL，于37℃温箱中放置80‑90分钟，然后用去离子水洗涤96孔酶标板3‑5次，甩干，备用；2)、将A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌等体积混合后，用包被液按1：1000～1100的体积比稀释后，包被处理后的96孔酶标板，每孔95‑105ul；然后于37℃温箱中烘干10‑18小时；3)、取过夜烘干的抗原包被96孔酶标板用200uL用PBS稀释的10%小牛血清的填满，然后于35‑38℃下封闭1‑2小时，即得抗原包被酶标反应板；其中，所述的A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌的浓度为3×l09cfu/mL。