[发明专利]一种基于质谱技术快速鉴定布鲁氏菌的方法及其用途

摘要

一种基于质谱技术快速鉴定布鲁氏菌的方法及其用途，本发明公开了一种用于快速鉴定布鲁氏菌的方法，包括PCR扩增、SAP酶消化、转录和核酸酶切、纯化、质谱仪检测等步骤。基于该方法，建立常见布鲁氏菌的核酸指纹图谱数据库。根据实验产生的质谱峰图，可对待检样品中的布鲁氏菌进行分类与鉴定，结果可广泛运用于布鲁氏菌的分型和分类、及环境卫生和公共安全检疫等领域。

主权项

一种基于酶切的布鲁氏菌核酸指纹图谱制备方法，其特征在于，它至少包括如下步骤：（1）PCR反应：使用针对细菌的PCR通用引物，分别扩增多个细菌的核酸模板，得到含扩增目标区域的PCR产物；（2）SAP酶消化：用碱性磷酸酶（SAP酶）处理步骤（1）得到的PCR产物；（3）转录和核酸酶切：使用特定的转录和内切酶，分别在一个反应体系中，对步骤（2）得到的各个细菌的消化产物进行转录和核酸酶切，获得一系列长度不一、丰度不一的核酸片段；（4）纯化：使用树脂处理步骤（3）得到的酶切产物；（5）质谱仪检测：将步骤（4）得到的纯化产物上点在含有基质的靶片上，上质谱仪进行检测，得到布鲁氏菌的特征核酸指纹谱图。