[发明专利]一种暗色唇鱼精子超低温冷冻保存方法

摘要

一种暗色唇鱼精子超低温冷冻保存方法，属于低温生物学技术领域。本发明的方法为：选择达到性成熟的优质原种或良种，用100ppm的MS-222麻醉5min，轻轻挤压擦干的腹部，成熟的精液流入5mL离心管中，检测鲜精活力，活力在85%以上的精液样品用于精子冷冻。将采集的优质精液与抗冻液（D-15+5%甲醇）按三步稀释法稀释，使精子终密度为2.5×108个/mL，分装入1.8ml冻存管中，4℃平衡30min，液氮面上6cm平衡10min，液氮面上平衡5min后投入液氮中保存。使用时将保存的精子在40℃水浴中解冻，进行人工授精。本发明具有成本低，操作简便，保持时间长，复苏后精子的活力较高，人工繁殖的暗色唇鱼的受精率和孵化率较高，能投入规模生产的优点；对于开展鱼类资源恢复与重建也具有重要意义。

主权项

一种暗色唇鱼精子超低温冷冻保存方法，其特征在于该保存方法的具体步骤如下：a. 配子的采集：采精方法为轻压腹部法，选择形态正常、生长良好、无疾病、达到性成熟的亲鱼原种或良种，用100 ppm的MS‑222麻醉5 min，鱼类腹部用毛巾擦干，然后轻轻挤压腹部，成熟的精液自然流出到5 mL离心管中；b. 鲜精活力检测：先用移液器滴一滴水于载玻片上，对准视野，然后用针尖挑取上述精液立即于显微镜下搅拌，观察其活力，鲜精活力在85%以上的精液样品用于精子冷冻；c. 冷冻方法：将精液与抗冻液按常规三步稀释法稀释至精子终密度为2.5×108个/mL后分装入1.8 mL冻存管中，经4℃平衡30 min，然后在液氮面上方6 cm处平衡10 min，液氮面上平衡5 min后投入液氮中保存；其中：抗冻液为稀释液D‑15+5%甲醇。