[发明专利]一种真菌发酵生产恩镰孢菌素类化合物的方法

摘要

本发明属于生物医药领域，具体公开了一种固体发酵生产恩镰孢菌素类化合物（Enniatins）的工艺。该方法以镰孢菌属（Fusarium）真菌为出发菌株，主要涉及发酵培养基的新配方、发酵条件控制及分离纯化工艺等步骤。通过本发明所述的方法，恩镰孢菌素类化合物在前期对数生长期内(10天)能迅速地获得目的产物，最终恩镰孢菌素类化合物的浓度可达2.0g／lkg培养基，具有极高的发酵效价；提取纯化工艺简单，质量可控，样品稳定好，通用性强，适合工业化生产。

主权项

一种利用镰孢菌属（Fusarium）真菌固体发酵生产恩镰孢菌素类化合物（Enniatins）的方法，包括以下步骤：步骤一：固体发酵培养菌种：镰孢菌属产恩镰孢菌素类化合物的真菌（可以是从其寄主中分离纯化得到，也可以从菌种保藏中心等机构获得)；培养基组成：0～5重量份的蛋白胨、500～1500重量份的水、1000重量份的大豆，PH值为5～8；接种量：将生长好的菌种按质量百分比1%～20%的比例接种；普通发酵培养条件：于16～32℃，光照培养或暗培养或明暗交替培养，培养周期为4～24天；发酵罐中的条件：罐压0.05MPa，通气量0.6～1.2vvm，发酵时间5‑10天；步骤二：目标产物的分离纯化发酵物的预处理：采用1～30倍体积的乙酸乙酯提取，收集溶剂部分；回收溶剂后得干膏；分离工艺：将所得干膏溶散到体积比为20%～80%醇/水中，以0.5～20倍体积的正已烷萃取，收集正已烷部位，回收溶剂，经干燥得灰白色粉末状粗提物；纯化工艺：以适当的溶剂溶解上述粗提物，采用无机基质为填料的色谱柱，以反相流动相冲柱，收集恩镰孢菌素洗脱部分，干燥后即得到恩镰孢菌素类化合物干粉。