[发明专利]一种发酵产低温脂肪酶的方法

摘要

本发明提供了一种发酵产低温脂肪酶的方法，是以自己筛选的野生菌株为出发菌种，采用优化的种子培养基、产酶培养基及发酵生产技术方法来制备低温脂肪酶的，发酵液最高酶活可达6000U/L以上，所产低温脂肪酶最适温度为30℃，在0℃仍具有65％的相对酶活，可广泛应用于洗涤剂、食品工业、造纸、医药、皮革、环境保护等领域，属于生物技术领域。

主权项

一种发酵产低温脂肪酶的方法，是以自己筛选的野生菌株为出发菌种，采用改进的种子培养基和产酶培养基及方法发酵制备低温脂肪酶，工艺为：(1)种子培养种子培养基：蛋白胨10g/L，氯化钠10g/L，酵母浸出汁5g/L，pH 7.0；取250ml的三角瓶若干个，每个装种子培养基50ml，121℃灭菌30分钟，冷却；在每个装种子培养基50ml的三角瓶中挑取一环菌接入，置于摇床培养，培养条件：温度30℃，转速200r/min，培养8小时即为发酵种子液；(2)产酶培养产酶培养基：牛肉膏40g/L，橄榄油10ml/L，Triton X‑1005ml/L，初始PH＝7.0，泡敌3ml/L；取产酶培养基4.5升加入到7升发酵罐中，121℃灭菌40分钟，冷却；按10％的接种量，将450ml发酵种子液加入到含产酶培养基的发酵罐中，设定发酵参数，，温度30℃，pH 7.0，转速350r/min，通气量1.5，L/min/L，发酵35小时；(3)脂肪酶液制备将发酵液用高速冷冻离心机在4℃10,800g离心15min的条件下离心，上清液即为脂肪酶粗酶液；(4)酶活力的测定以对硝基苯丁酸酯p‑NPB为底物，将pH 9.0的3.7mL 0.1mol/L Tris‑HCl缓冲液和0.2mL 10mmol/L p‑NPB组成的反应体系，30℃保温15min后加入0.1mL酶液，在405nm下测吸光值，以1min内催化产生1μmol的对硝基酚，系数ε＝1.86×104cm‑1×M‑1，所需的酶量为1个酶活力单位。