[发明专利]预防和治疗人乳头瘤病毒感染类疾病的化合物的筛选方法

摘要

本发明公开了一种预防和治疗人乳头瘤病毒(HPV)感染类疾病的化合物的筛选方法，该方法采用基于结构的计算机辅助药物设计，以人乳头瘤病毒E1解旋酶结构为基础进行筛选，得到能抑制E1的候选化合物；上述筛选方法具有方便、省时、高效的安捷伦液质分析培训特点；本发明还公开了利用上述筛选方法得到的化合物，如曲伐沙星及其衍生物、加替沙星及其衍生物，这些人乳头瘤病毒E1解旋酶的抑制剂具有特异性高、针对性强的特点，有助于预防和治疗人乳头状瘤病毒感染，以及和HPV感染有关的疾病，如子宫颈癌和生殖器疣等疾病。

主权项

一种预防和治疗人乳头瘤病毒感染类疾病的化合物曲伐沙星、加替沙星的筛选方法，其特征在于该方法为：采用结构计算机辅助药物设计方法，以人乳头瘤病毒E1解旋酶结构为基础进行筛选，所述人乳头瘤病毒E1解旋酶结构为：一个由原子坐标确定下来的E1蛋白分子结构和由E1形成的六聚体的结构；所述结构计算机辅助药物设计方法为：1)E1蛋白结晶：牛乳头瘤病毒E1蛋白结晶是用20mg/ml的蛋白浓度，在含有pH 7.5 100mM MES，pH 7.5 300mM KPO4，190mM NaCl，8％ PEG6K的溶液里，用悬滴气相扩散法，在18度的条件下进行；2)结晶的晶包常数为：p212121，a＝133.211，b＝179.192，和c＝185.350，α＝β＝g＝90；晶体衍射分辨率为3.1埃；3)E1的六聚体的总体结构如图5(A、B)所示，E1亚基组装成有一中央通道的同源六聚结构；从侧面看，六聚体环显示为两个不同直径的环，即在顶部小环和底部大环；这两个层次的环六聚体的厚度是80埃；4)E1的单体结构：在E1的单体结构中包含两个单独的结构域，N‑端结构域和C端AAA+域；N‑端的结构域全是α‑螺旋，但C‑端的结构域有5个β‑结构形成的β折叠，如图5(C、D)所示；5)计算机模拟药物筛选：根据牛乳头瘤病毒E1的晶体结构，通过计算机模拟建立了人乳头瘤病毒16和18型E1解旋酶的结构模型，并以此结构模型，对小分子数据库进行计算机对接，以筛选出能结合E1的化合物；6)筛选出能结合在人乳头瘤16型E1上的两种候选化合物曲伐沙星和加替沙星，它们结合在E1蛋白上的位点分别如图6(A、B)所示，两个分子对接的自由能分别是‑7.69kcal/mol和‑6.95kcal/mol；采用电泳迁移率试验进行E1解旋酶功能检测，筛选得到具有预防和治疗人乳头瘤病毒感染类疾病的作用抑制E1的候选化合物：曲伐沙星、加替沙星。