[发明专利]利用体细胞胚繁育文山兜兰苗的方法

摘要

本发明提供一种利用体细胞胚繁育文山兜兰苗的方法，经过把成熟文山兜兰果实灭菌后，切开果实取出种子，接种于诱导萌发培养基中培养得到幼胚，再转接到液体培养基中得到体细胞胚；然后分化培养得到分化苗；再转接到生根培养基上进行生根培养，最后炼苗移栽，即得到文山兜兰苗。本发明通过使用文山兜兰成熟果实无菌萌发后获得的幼胚，打破芽的休眠，促进种子萌发，促进愈伤组织生长，对植物体细胞胚进行快速培养，使得文山兜兰组培增值系数由原来1倍提高到5倍以上，大大提高了文山兜兰的繁殖效率，移栽后成活率达90%以上。

主权项

一种利用体细胞胚繁育文山兜兰苗的方法，其特征在于经过下列各步骤：（1）把成熟文山兜兰果实灭菌后，切开果实取出种子，接种于下列诱导萌发培养基中：Ms＋2.0mg/L的6‑BA＋100ml/L的椰子汁＋80g/L的香蕉泥＋50g/L的土豆泥＋5g/L的活性炭＋30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂，pH值为5.2～5.4；暗培养至种子萌发后，转入1000～1500lx的弱光下，培养30天，得到幼胚；（2）将步骤（1）得到的幼胚转接到下列液体培养基中：Ms+2.0mg/L的6‑BA+0.5mg/L的TDZ+100ml/L的椰子汁+80g/L的香蕉泥+50g/L的土豆泥+5g/L的活性炭+30g/L的蔗糖，pH值为5.2～5.4；在温度为26～27℃，光照强度为1000～1500lx，转速为120～150r/min的条件下，培养45天，每15天更换一次上述液体培养基，过滤分离出的培养物即为体细胞胚；（3）把步骤（2）得到的体细胞胚切散后，转接到下列分化培养基上：1/2Ms+1.0mg/L的6‑BA+100ml/L的椰子汁+80g/L的香蕉泥+50g/L的土豆泥+5g/L的活性炭+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂，pH值为5.2～5.4；在温度为26～27℃，光照强度为2000～2500lx条件下，培养90～120天，每45天更换一次上述分化培养基，直至小苗长出2～3片的伸长叶片，且株高2～3cm时，即得到分化苗；（4）把步骤（3）得到的分化苗切去小苗基部黄、褐部分，再转接到下列生根培养基上：1/2Ms+0.5mg/L的6‑BA+1.0mg/L的NAA+100ml/L的椰子汁+100g/L的香蕉泥+50g/L的土豆泥+5g/L的活性炭+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂,pH值为5.2～5.4；在温度为26～27℃，光照强度为2000～2500lx的条件下，培养至苗高为4～5cm，根长3cm以上，即得种苗；（5）将步骤（4）所得种苗在30%遮阴度的自然光下放置7～10天后，用稀释1000倍的多菌灵溶液浸泡种苗10分钟后，移栽至下列质量比的混合基质中：蕨根:兰石:细树皮＝1:4:1，保持基质的水分为70～85%，并适当通风，即得到可移栽的文山兜兰苗。