[发明专利]一种乳及乳制品中低分子肽的提取方法

摘要

本发明涉及一种乳及乳制品中低分子肽的提取方法。目的是提供的方法具有提取效果好、净化性能佳的优点。技术方案是：1）初提：用缓冲液将生鲜乳或乳粉稀释稀释1～5倍，去除脂类和乳与乳制品中的高分子蛋白和其他颗粒物，得到低分子肽初提取液；2）初净化：将初提取液经过萃取和去杂质；然后将萃取柱上的低分子肽洗脱下来，收集洗脱溶液，最后旋转蒸发掉洗脱溶液中的甲醇或乙腈，得到低分子肽初净化液；3）再净化：将获得的初净化液pH值调到2～4以内，接着将低分子肽吸附并富集在该固相树脂上，随后将不带电荷的有机小分子物质和杂质洗涤掉，再用氨水甲醇溶液洗脱固相树脂，收集洗脱液。4）蒸发：得到高纯度的低分子肽混合物。

主权项

一种乳及乳制品中低分子肽的提取方法，按以下步骤进行：1）初提用缓冲液将生鲜乳稀释1～5倍，或用缓冲液将乳粉稀释5～15倍，用正己烷或乙醚—石油醚混合溶液去除脂类；接着采用超滤膜以及离心或抽滤的方式去除乳与乳制品中的高分子蛋白和其他颗粒物，得到低分子肽初提取液；乙醚—石油醚混合溶液中，乙醚的体积比例为30%～70%，其余是石油醚；2）初净化将上述初提取液经过C18反相固相萃取柱的萃取；接着先用1%—5%的甲醇溶液或乙腈溶液洗去前述萃取柱上的强极性的杂质，然后用40%—70%的甲醇洗脱溶液或乙腈洗脱溶液将前述萃取柱上的低分子肽洗脱下来，收集洗脱溶液；最后蒸发掉洗脱溶液中的甲醇或乙腈，剩下的溶液即为低分子肽初净化液；3）再净化用盐酸或硫酸或甲酸或乙酸溶液将获得的初净化液pH值调到2～4以内，以使低分子肽上的氨基“—NH2”带上H+变为“—NH3+”；接着将前述溶液通过带有负电荷基团的阳离子交换固相萃取小柱，以将低分子肽吸附并富集在该固相树脂上；随后，依次用酸性、中性洗涤液将不带电荷的有机小分子物质和杂质洗涤掉，再用氨水甲醇溶液洗脱固相树脂，使低分子肽上的“‑NH3+”重新成为不带电荷的“‑NH2”状态，并随氨水甲醇溶液洗脱下来，收集洗脱液；4）蒸发洗脱液经过低温氮吹至净干，得到高纯度的低分子肽混合物。