[发明专利]一种黄连木芽染色体制片的方法

摘要

本发明提供一种黄连木芽染色体制片的方法，采用0.002mol/L的8-羟基喹啉溶液进行低温预处理；卡诺氏固定液固定；2%纤维素酶30℃水浴锅中酶解40min，再用卡诺氏固定液固定20min，1mol/L盐酸60℃水浴中解离5min，用蒸馏水漂洗；将组织块切割成碎块，卡宝品红染色剂染色15min；压片法制片，镜检，在OLYMPUSCX/MD50显微摄影装置下进行显微照相。本发明的制片方法操作简单方便，确定了进行黄连木芽染色体制片的最佳取材时间、取材部位以及制片方法，使获得的染色体分散均匀，背景浅，易于观察，得出的染色体数目准确度高。

主权项

一种黄连木芽染色体制片的方法，其特征是：A、取材：每年四月中上旬上午9‑10时取黄连木树上新生的嫩芽，沿嫩芽腹线切割成两部分；B、预处理：将切割好的嫩芽用蒸馏水清洗干净，吸水纸吸干水分后放入浓度为0.002 mol/L的8‑羟基喹啉溶液中，在暗处预处理2 h 50 min；C、固定：将预处理后的嫩芽用吸水纸吸干，除去残余的预处理液后放入卡诺氏Ⅰ固定液中，在4℃冰箱中固定2 h 20 min，固定好后的材料转入70%乙醇中保存备用；D、酶解：将固定好的嫩芽用蒸馏水漂洗3次，每次10 min，吸干水分后放入2%纤维素酶溶液中，在30℃水浴锅中酶解40 min；E、再固定：将酶解后的嫩芽再用卡诺氏Ⅰ固定液固定20 min；F、解离：将再固定后的材料放入1 mol/L盐酸溶液中，在60℃水浴锅中解离5 min，解离后用蒸馏水漂洗2次，每次5 min；G、染色：将解离后的嫩芽置于载玻片上，取呈现出乳白色的组织块，用吸水纸吸干组织块周围的水分，用解剖刀将取下的组织块切割成碎块，滴入1‑2滴卡宝品红染色剂，染色15 min，然后用蒸馏水漂洗；H、压片：将材料重新移至载玻片上，捣碎组织块，并使其均匀分散在载玻片上，盖上盖玻片，置于酒精灯上微热，使细胞进一步软化和增强染色，静置片刻，在盖玻片上放一张滤纸，并用左手食指压紧，右手持带橡皮的铅笔的橡皮头端先轻后重的敲击盖片，使细胞压平，然后放置在平整的桌面上，用拇指压紧盖玻片；I、镜检：将压片置于生物显微镜下观察，选择染色体分散、清晰的细胞在显微摄影装置下进行显微照相，以便进行染色体计数，同时用记号笔在载玻片和盖玻片上分别做记号。