[发明专利]一种薄荷节间茎段高效再生体系的方法

摘要

一种薄荷节间茎段高效再生体系的方法涉及薄荷节间茎段高效再生体系的方法，以薄荷无菌苗形太学第2，3，4节间茎段为材料，接种于不定芽诱导培养基上，经过诱导、伸长生长、继代增殖、壮苗、生根等关键技术的研究，最终建立了这种节间茎段再生的方法。本发明的优点是诱导不定芽再生率高达95％，并且稳定性好，操作简单，再生周期短，可用于作为农杆菌遗传转化的受体系统。

主权项

一种薄荷节间茎段高效再生的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)外植体的选取与消毒：取薄荷茎尖作为外植体，冲洗干净后，进行消毒；(2)节间茎段不定芽的诱导：取步骤(1)中得到的无菌苗节间作为外植体，接种于不定芽诱导培养基中，培养温度25±3℃，暗培养40天；所述诱导培养基为MS基本培养基并添加激素TDZ、IAA；所述诱导培养基中TDZ浓度为2.0‑4.0mg·L‑1，IAA浓度为0.2‑0.5mg·L‑1；(3)不定芽继代生长：将步骤(2)中诱导出的不定芽剪下接入不定芽继代生长培养基中培养30天，所述所述继代生长培养基为MS培养基并添加激素6‑BA和NAA；所述继代生长培养基中6‑BA浓度为0.5‑1.0mg·L‑1，NAA浓度为0.1‑0.5mg·L‑1；所述正常培养条件为培养温度25±3℃，光照时间8‑10h，光照强度1500‑2000lx；(4)无菌苗的壮苗培养：将步骤(3)中的到的无菌苗接种于壮苗培养基中培养20‑35天，所述所述继代生长培养基为MS培养基并添加激素6‑BA和NAA；所述继代生长培养基中6‑BA浓度为0.5‑1.0mg·L‑1，NAA浓度为0.3‑0.5mg·L‑1；所述正常培养条件为培养温度25±3℃，光照时间8‑10h，光照强度1500‑2000lx；(5)生根培养：将步骤(4)获得的无菌苗接种于生根培养基中培养15‑20天，所述生根培养基为1/2MS培养基并添加激素6‑BA和NAA；所述继代生长培养基中6‑BA浓度为0.1‑0.5mg·L‑1，NAA浓度为0.5‑1.0mg·L‑1；所述正常培养条件为培养温度25±3℃，光照时间8‑10h，光照强度1500‑2000lx；上述诱导培养基、继代培养基、壮苗培养基、生根培养基中均含有琼脂5.5‑7.0g/L、蔗糖25‑35g/L，且pH值为5.6‑5.8。