[发明专利]一种人胃癌多药耐药细胞系

摘要

本发明公开了一种胃癌多药耐药细胞系。该胃癌多药耐药细胞系是采用基因克隆构建人胃癌多药耐药细胞系，其构建方法是利用逆转录病毒作为载体，将mdr1cDNA基因克隆到胃癌细胞，使其表达有功能的mdr1，产生稳定的耐药性，从而建立胃癌mdr细胞系。该方法建立的人胃癌多药耐药细胞系，提高了胃癌细胞对化疗药物的耐药性，同时构建了单一mdr1介导胃癌多药耐药的研究平台，在研究胃癌mdr1介导多药耐药及其逆转的作用机理以及深入研究胃癌多药耐药提供细胞模型等方面具有应用前景。

主权项

一种胃癌多药耐药细胞系，其特征在于胃癌多药耐药细胞系按以下步骤建立：（1）将SGC7901细胞放于含100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素的RPMI‑1640培养基中，置37 ℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中培养；（2）将逆转录病毒载体pHaMDR1转化至DH5α大肠杆菌并扩增；（3）用lipofectamineTM 2000转染试剂将逆转录病毒载体pHaMDR1转染包装细胞293T，转染后的包装细胞293T继续培养，收集病毒；（4）将病毒液加入步骤（1）所得的SGC7901细胞，37 ℃培养6 h后，换用含血清的培养基继续培养；（5）重复上述步骤（4），将感染后的细胞培养于含60ng∕ml秋水仙碱的培养基，培养至克隆形成为止，即得到具有耐药性的SGC7901/mdr1细胞系。