[发明专利]从骨髓中一次性同时培养获得基质干细胞与内皮祖细胞的制备方法及其用途

摘要

一种从骨髓中一次性同时培养获得基质干细胞与内皮祖细胞的制备方法，及其用途。该方法直接从骨髓中一次性同时培养基质干细胞和内皮祖细胞，所制备的上述两种细胞纯度高、方法简单、快速扩增获得。所制备的基质干细胞和内皮祖细胞增殖的细胞数可达到2×108以上，细胞活力大于95％，满足临床上高数量级的治疗需要。

主权项

一种从骨髓中一次性同时培养获得基质干细胞与内皮祖细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：5‑20ml骨髓直接经葡蔗糖‑泛影酸纳溶液密度梯度离心分离，并通过1×PBS洗涤三次获得单个核细胞；然后将一半所述单个核细胞在α‑MEM完全培养基培养获得基质干细胞，另一半所述单个核细胞在EGM‑2完全培养基中培养获得内皮祖干细胞；其中，基质干细胞的制备过程为，将一半所述单个核细胞在α‑MEM完全培养基中原代培养，当培养瓶中基质干细胞生长到80％以上，用0.025％胰酶消化后进行扩增，每次1瓶培养瓶扩增到2瓶，连续扩增5代，其细胞数量级达到2×108以上；其中，所述的α‑MEM完全培养基包括10％胎牛血清、20ng/mL碱性成纤维生长因子；内皮祖细胞的制备过程为，另一半所述单个核细胞在EGM‑2完全培养基中原代培养，当内皮祖细胞在用3μg/cm2纤维连接蛋白包被的培养瓶中生长到80％以上，用0.025％胰酶消化后进行扩增，每次1瓶培养瓶扩增到2瓶，连续扩增5代，其细胞数量级达到2×108以上；其中，所述的EGM‑2完全培养基包括5％胎牛血清、50ng/mL表皮生长因子、50ng/mL血管内皮生长因子、50ng/mL人胰岛素样生长细胞因子、1ug/mL氢化可的松。所述胎牛血清的浓度为v/v，所述胰酶的浓度m/v，所述PBS的pH值为7.4。