[发明专利]一种判别棘头梅童鱼产地和生活史的方法

摘要

本发明涉及一种判别棘头梅童鱼产地和生活史的方法，特征是：取样本分类放于冰箱内保存待用；标本解冻后取左或右侧矢耳石用水清除耳石表面的有机质并自然晾干；先用热熔胶固定耳石，再用混合树脂调匀后包埋耳石，双面磨制耳石；用透反射光确认磨至核心后，经抛光、清洗、镀碳薄膜后方可用X射线电子探针微区分析仪进行耳石样品的定量线分析；以及分析时确定的各状态参数都保证了所取得的结果稳定性好，可重复性高、系统误差小，可判别性强，克服了目视、遗传学等方法无法判别的局限，亦可有效区别不同产地的棘头梅童鱼群体和其生活史阶段划分。该方法同样为了解其它洄游鱼类的生活史规律提供了便利。

主权项

一种判别棘头梅童鱼产地和生活史的方法，其特征是：采用以下工艺步骤：(1)、野外采集不同水域的棘头梅童鱼样本先放入清洁的塑料自封袋中，并在0～4℃保存，在此温度条件下尽快运回实验室保存；（2）、野外采集并运回实验室保存的棘头梅童鱼，取体长规格接近的样本转移于‑18～‑20℃冰箱内保存，待用；（3）、棘头梅童鱼耳石样本前处理方法：(3‑1)、取出样本左或右侧矢耳石解冻后，经超纯水清除表面的有机质，清洗干净后，室温下晾干、干燥保存作为分析的材料待用；(3‑2)、取含聚氨酯胶成分>25%的热熔胶将耳石平滑的面固定在载玻片上，等热熔胶冷却10～15分钟变硬后，先将耳石在500目水砂纸上进行粗磨，并随时在正置金相显微镜上用透反射光观察表面状况，待首次观察到轮纹时换用1200目水砂纸细磨2～5分钟使表面平滑，然后用酒精灯将热熔胶熔化后取出耳石；(3‑3)、将未磨过的光面耳石用双面胶将其固定在镶样模内，做好样本标签，将冷镶嵌用透明的环氧树脂和硬化剂的质量比为5:1的比例调匀后，往每个镶样模内注入3～4 ml混合树脂溶液，将耳石包埋于其中；放入40℃～45℃的干燥箱中烘12小时～15 小时至完全固化；(3‑4)、取出镶样模内包埋有耳石的固化树脂块，选用500目水砂纸对未磨过的光面耳石进行粗磨，待粘在耳石上的双面胶全部磨掉后换用1200目水砂纸进行精磨，期间随时在金相显微镜上观察表面状况，用透反射光确认磨至核心后，将树脂块洗净待用；(3‑5)、使用金刚石抛光液和MD抛光布以120～150rpm的转速在抛光机上抛光3～5分钟至耳石表面无刮痕为止；将所有抛光的树脂块放入超纯水环境中进行超声清洗3～5分钟后，自然晾干24小时为耳石样本；（4）、棘头梅童鱼耳石样本微区分析：(4‑1)、将耳石样本置于真空镀膜机中，在真空度达到≦2x10‑4Pa，电流达到35A～36A时，镀碳薄膜20～25秒；(4‑2)、从耳石样本核心顺着最长横轴向边缘用电子探针显微分析仪进行耳石样本的定量线EPMA分析；在测Sr、Ca元素的浓度值之前先做机器状态校验和标准分析，利用碳酸钙、碳酸锶或钛酸锶作为检验定量测定结果的标准物质；(4‑3)、由上述电子探针显微分析仪沿耳石样本矢状面所获各点定量线分析数据用Sr和Ca含量的比率值表示；每个测定点到耳石核心的距离被称为耳石径，统一使用锶含量/钙含量×103的比值表示，简称Sr/Ca比值；耳石不同区域Sr: Ca的含量比值数据用平均值±标准差进行统计分析；差异的显著水平判定用曼‑惠特尼U测验进行；根据Sr: Ca含量比值的显著性差异水平，区别棘头梅童鱼的产地和不同的生活史。