[发明专利]一种可溶藻的赖氨酸芽孢杆菌原生质体制备与再生方法

摘要

本发明一种可溶藻的赖氨酸芽孢杆菌原生质体制备与再生方法，属于环境工程微生物领域。本发明采用原生质体制备与再生方法，工艺简单，便于操作，可重复性强；所获得的原生质体制备率最高可达86.25%，且再生率最高可达在76.81%，原生质体体制备率高且原生质体活性保持较好，有利于后续兼具溶藻与降解MC-LR功能的融合子的制备与再生。

主权项

一种溶解铜绿微囊藻的赖氨酸芽孢杆菌的原生质体制备与再生方法，其特征在于按照下述步骤进行：（1）菌种活化培养：将保藏的菌株F8重新转接至平板划线分离3次，挑取单菌落接种至新鲜的细菌液体培养基中，置于温度为30℃，转速120 r/min的振荡培养箱中纯培养至对数期，为108‑109个/mL；（2）原生质体的破壁酶解：取4 mL活化的菌液，4500 r/min离心10 min，收集菌体，经SMM缓冲液洗涤3次，用3.2‑3.8mL的SMM缓冲液重悬；加入0.1‑1 mg/mL的溶菌酶0.2‑0.8mL，在水浴温度30℃条件下酶解0.17‑1 h；酶解结束后，3000 r/min离心收集原生质体，用0.55 mol/L的NaCl溶液洗涤3次，洗去酶解液后用4 mL 0.55 mol/L NaCl溶液悬浮即可制备得到原生质体；（3）原生质体的再生：       取上述步骤的原生质体悬浮液，用高渗NaCl溶液稀释到合适的三个梯度，分别吸取200 μl涂布于高渗固体培养基，每个梯度做三个平行，置于30℃恒温培养箱培养48 h，使得原生质体再生。