[发明专利]一种胶原蛋白组织工程皮肤的制备方法

摘要

一种胶原蛋白组织工程皮肤的制备方法，它包括以下步骤：a、胶原蛋白的提取，b、胶原蛋白与壳聚糖的复配，c、胶原蛋白与PLGA得复合，将PLGA立体支架放入模具中，注入胶原溶液使其没过支架，于-20℃冻结，该PLGA立体支架由PLGA溶液经静电纺根据模具的规格制成，将经冻结的模具进行真空冷冻干燥，得到由胶原-壳聚糖和PLGA组成的复合支架。它制备出来的人工皮肤，可以用于各种创面修复，生物相容性好，可替代自体植皮，用途广泛，前景广阔。

主权项

一种胶原蛋白组织工程皮肤的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：a、胶原蛋白的提取，取新鲜牛跟腱，去除筋膜，切成1cm～2cm长的小段，倒入氢氧化钠溶液中充分搅拌进行病毒灭活，反应结束用4℃的纯化水充分洗涤至中性；将经预处理的牛跟腱放入组织捣碎机中充分捣碎，经捣碎的牛跟腱放入反应釜中，加入4℃、pH=2的醋酸溶液，按重量计经捣碎的牛跟腱∶醋酸溶液=1:60～80，再添加胃蛋白酶，胃蛋白酶的添加量为按重量计醋酸溶液的3%～10%，反应24h～48h；反应结束将胶原溶液稀释至料液比1:150，稀释后的胶原溶液真空抽滤，收集滤液，不滤物进行2次提取，滤液中加入过氧化氢溶液灭酶，将经过灭酶处理的胶原溶液经4000r/min离心，取上清液，将澄清的胶原溶液至于盐析操作台上，用饱和氯化钠溶液盐析，直至氯化钠的终浓度约为5%，经盐析的胶原溶液经高速离心甩干去除多余水分；将经甩干的胶原放入截留分子量为8000‑14000Da的透析袋中，于4℃条件下进行透析脱盐直至透析液中无氯离子检出，将透析得到的胶原配制成5mg/ml的溶液；b、胶原蛋白与壳聚糖的复配，按0.5%的比例将壳聚糖倒入蒸馏水中充分混匀，再按0.5%的浓度加入醋酸充分搅拌摇匀，使壳聚糖溶解，按胶原蛋白：壳聚糖=9:1的比例配制胶原‑壳聚糖溶液，按0.1% 的比例加入戊二醛溶液进行交联，配制好的溶液于负压条件下除气泡；c、胶原蛋白与PLGA得复合，将PLGA立体支架放入模具中，注入胶原溶液使其没过支架，于‑20℃冻结，该PLGA立体支架由PLGA溶液经静电纺根据模具的规格制成，将经冻结的模具进行真空冷冻干燥，得到由胶原‑壳聚糖和PLGA组成的复合支架。