[发明专利]一种溶珊瑚弧菌多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒和检测方法

摘要

本发明公开了一种溶珊瑚弧菌多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒和检测方法。本发明针对已知20个溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliiluyitcus)的毒力基因，设计特异性引物，利用本发明的检测试剂盒，按照本发明的方法，可以通过单管反应，一次性快速、高效的同时检测20种基因，而得知检测出样品或环境中是否含有携带这些毒力相关基因、具有潜在致病能力的溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliilyticus)，其检测覆盖面广，可大大提高溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliilyticus)致病性评价的准确性，为溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliilyticus)致病性评价提供了更为有效的检测手段，在对珊瑚虫白化病害的监测、防治方面具有重大的意义。

主权项

一种溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliilyticus)多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒，包括PCR反应试剂，多基因PCR引物和GeXP多重扩增反应试剂，其特征在于，所述的多基因PCR引物包括20对溶珊瑚弧菌多重毒力相关因子的PCR引物和一对通用引物，具体为：为毒力相关基因flhA设计的引物：flhA‑F：AGGTGACACTATAGAATATCCATATCAGGGCGAATCTCflhA‑R：GTACGACTCACTATAGGGACTTATTCCTGCGGTCCACAT为毒力相关基因TonB设计的引物：tonB‑F：AGGTGACACTATAGAATACTCCTCAATCACAGCGTTCATonB‑R：GTACGACTCACTATAGGGAGGCTTGAGTGTCAGCAACAA为毒力相关基因RpoE基因设计的引物：RpoE‑F：AGGTGACACTATAGAATATTGCAAAAGGGGTTGAATCTRpoe‑R：GTACGACTCACTATAGGGACGAGCTTGATGGCTTGAGTT为毒力相关基因DNAJ基因设计的引物：dnaJ‑F：AGGTGACACTATAGAATATCGGTGACATTTTTGGTGACdnaJ‑R：GTACGACTCACTATAGGGAGCGAACCGCTTCTTCTAGTG为毒力相关基因VgrG基因设计的引物：VgrG‑F：AGGTGACACTATAGAATAGTTGTTCTTCCCCTCACATVgrG‑R：GTACGACTCACTATAGGGACGTTGTTCTTCCCCTCACAT为毒力相关基因MviN基因设计的引物：MviN‑F：AGGTGACACTATAGAATAGCAATCAACTGACGGGTTTTMviN‑R：GTACGACTCACTATAGGGAGCGCTGACGTCTTCTTCTTT为毒力相关基因VvgS基因设计的引物：VvgS‑F：AGGTGACACTATAGAATATGTGGTAGCTGCTCCTGTTGVvgS‑R：GTACGACTCACTATAGGGATGGTTGAGTTGCGATTTTCA为毒力相关基因FlgN基因设计的引物：FlgN‑F：AGGTGACACTATAGAATACCAGTTTGCCCTGAGTTTGTFlgN‑R：GTACGACTCACTATAGGGAGCGACTTTGACCAATGATCC为毒力基因相关YihE基因设计的引物：YihE‑F：AGGTGACACTATAGAATAGTTGGCTGAGTCATCCCATTYihE‑R：GTACGACTCACTATAGGGACTCGAATGCCCTTTAAGCAC为毒力相关基因vcpA基因设计的引物：vcpA‑F：AGGTGACACTATAGAATAAGCAAAACTCAGGGTTGGTGvcpA‑R：GTACGACTCACTATAGGGAGGCCATCTTTTGATGGAAGA为毒力相关基因FliL基因设计的引物：FliL‑F：AGGTGACACTATAGAATAAGCCGGATCTGACAACAAATFlIL‑R：GTACGACTCACTATAGGGACCTGCTAAGGACGTGATCGT为毒力相关基因PilQ基因设计的引物：PilQ‑F：AGGTGACACTATAGAATAAGGAATGTCGCCTAACAACGPilQ‑R：GTACGACTCACTATAGGGATGGATCTGAATGTCACCCAA为毒力相关基因LuxS基因设计的引物：LuxS‑F：AGGTGACACTATAGAATAGCTAAGACAATGACCACGCCLuxS‑R：GTACGACTCACTATAGGGAGTAAAAGCCAGTACGGCAGC为毒力相关基因ToxR基因设计的引物：ToxR‑F：AGGTGACACTATAGAATAGGCTTAACTTGCTTTGCGACToxR‑R：GTACGACTCACTATAGGGACTAAGCGCGGCTATCAACTT为毒力相关基因hcp基因设计的引物：hcp‑F：AGGTGACACTATAGAATAGTGAACAGCAGTCTTGTGCChcp‑R：GTACGACTCACTATAGGGAGTCTATCACGGGCGAAACTC为毒力相关基因PilP基因设计的引物：PilP‑F：AGGTGAPilPCACTATAGAATAGAGGAAATGCTGGTGATGGTPilP‑R：GTACGACTCACTATAGGGATTCACACGTTCGTACCGAGA为毒力相关基因TolR基因设计的引物：TolR‑F：AGGTGACACTATAGAATATACGTTGCTCTTTATCGGGCTolR‑R：GTACGACTCACTATAGGGAGTCATGCTGGTGTTGCTGAT为毒力相关基因pyrH基因设计的引物：pyrH‑F：AGGTGACACTATAGAATAGCATACGTCAATGCTCGTGTpyrH‑R：GTACGACTCACTATAGGGATACCGGGTCAGCCGTAAATA为毒力相关基因TfoX基因设计的引物：TfoX‑F：AGGTGACACTATAGAATATTGGTGGATTCGGACTGTTTTfoX‑R：GTACGACTCACTATAGGGATGTTGACGTTGCTCAGCTCT为毒力相关基因Cpx基因设计的引物：Cpx‑F：AGGTGACACTATAGAATATAGCAACGCCTGAACCTTTTCpx‑R：GTACGACTCACTATAGGGACGTTGTTCTTCCCCTCACAT；含有荧光标记的通用引物对序列，可按常规技术将荧光标记加到通用引物序列上：TY‑F:5’‑AGGTGACACTATAGAATA‑3’TY‑B:5’‑GTACGACTCACTATAGGGA‑3’。