[发明专利]球等鞭金藻胞外多糖的分离纯化工艺

摘要

一种球等鞭金藻胞外多糖的分离纯化工艺，它以球等鞭金藻培养液为原料制得球等鞭金藻胞外粗多糖；采用离子交换柱层析对球等鞭金藻胞外粗多糖ECPS进行分离，获得中性多糖和酸性多糖组分；将中性多糖和酸性多糖组分加载于凝胶柱层析，获得8个组分，除ECPSⅡ-A组分外，其余多糖组分量较少；采用凝胶柱层析纯化ECPSⅡ-A组分，获得单一多糖组分。经乙醇沉淀和冷冻干燥，制备到胞外纯多糖ECPSⅢ。本发明方法建立了球等鞭金藻胞外多糖的分离纯化工艺，该工艺简单合理，而且具有稳定的重现性和良好的可操作性。为后续研究此多糖的生理活性奠定了良好的实验基础；并且该微藻多糖与其它多糖类物质一样，可以在医药和医学领域中得到应用。

主权项

一种球等鞭金藻胞外多糖的分离纯化工艺，其特征在于，其步骤如下：（1）选取培养至指数生长阶段的球等鞭金藻培养物，5000 rpm/ min下离心15 min，取上清液经0.22 µm微孔滤膜过滤后，45℃下减压浓缩；冷冻干燥后，获得白色粉末状的胞外物质；（2）取胞外物质，加入蒸馏水中，蒸馏水与胞外物质的质量比为15:1，混合均匀后，用0.5 M NaOH调节pH至9.0，在70℃水浴锅中提取240 min；提取结束后，5000 rpm/ min下离心5 min，取上清液加入质量浓度3% 的三氯乙酸，4℃下静置4 h后，5000 rpm/ min下离心5 min，弃去沉淀；上清液加入3倍体积无水乙醇，4℃下静置24 h，5000 rpm/ min下离心5 min，收集白色乳状沉淀；沉淀依次经丙酮、无水乙醇洗脱后，40℃下烘干，粉碎后，得白色粉末状物质即为球等鞭金藻胞外粗多糖ECPS；（3）采用DEAE‑52离子交换柱层析对球等鞭金藻胞外粗多糖进行分离，获得中性多糖ECPSⅠ和酸性多糖ECPSⅡ组分；（4）采用Sephadex G‑100凝胶柱层析进一步分离纯化中性多糖和酸性多糖组分；其中，中性多糖组分经分离，得到3个组分，分别记为ECPSⅠ‑A、ECPSⅠ‑B和ECPSⅠ‑C；酸性多糖组分经分离，得到5个组分，分别记为ECPSⅡ‑A、ECPSⅡ‑B、ECPSⅡ‑C、ECPSⅡ‑D和ECPSⅡ‑E；（5）富集上述8个多糖组分中多糖组分量最大的ECPSⅡ‑A；经多次富集，经减压浓缩后，将其加载于Sephadex G‑100凝胶柱层析；洗脱后，获得单一多糖组分，经乙醇沉淀和冷冻干燥后，得到白色粉末状固体，为胞外纯多糖，记为ECPSⅢ。