[发明专利]检测残留苯乙醇胺A的酶联免疫试剂盒及其使用方法

摘要

本发明公开了检测残留苯乙醇胺A的酶联免疫试剂盒及其使用方法，属于酶联免疫吸附分析方法技术领域。所述试剂盒包括：包被苯乙醇胺A抗原的酶标板、苯乙醇胺A标准品工作液、苯乙醇胺A抗体工作液、苯乙醇胺A酶标二抗工作液、底物液、终止液、浓缩洗涤液和浓缩样品稀释液。本发明的试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)方法，标准品或待测样本残留的苯乙醇胺A和酶标板上预包被的抗原共同竞争苯乙醇胺A抗体。该方法可以用于直接检测动物源性食品、尿样、动物组织和血清样品中的苯乙醇胺A，具有方便、快速、灵敏等特点，适用于大批量样品检测，本试剂盒灵敏度0.1ng/mL。

主权项

一种检测残留苯乙醇胺A的酶联免疫试剂盒，其特征在于包括酶标板96孔、苯乙醇胺A标准品工作液、苯乙醇胺A抗体工作液、苯乙醇胺A酶标二抗工作液、底物液、终止液、浓缩洗涤液和浓缩样品稀释液；    其中，所述酶标板是包被苯乙醇胺A抗原的酶标板，苯乙醇胺A抗原是用0.05 mol/L  pH 9.6的碳酸盐包被缓冲液稀释成1:8000比例，100微L/孔，37℃，2h，取出4℃放置过夜；取出酶标板甩掉板内液体，用稀释后的浓缩洗涤液300微L/孔，洗板3次，1min/次；然后加入0.5% BSA封闭，150微L/孔，37℃放置2h；取出酶标板甩掉板内液体，用洁净的毛巾包裹后拍干板内残留液体；将拍干后的酶标板整齐地摆放置GMP车间恒温25℃晾干；抽检要求板内孔与孔之间，板间的OD值变异系数均小于10%；检验合格后将酶标板密封后置4℃下保存；    其中，所述苯乙醇胺A标准品的浓度分别为0 ng/mL、0.1 ng/mL、0.3 ng/mL、0.9 ng/mL、2.7 ng/mL、8.1 ng/mL；    其中，所述苯乙醇胺A抗体工作液是用抗体稀释液稀释成1:10000比例；所述苯乙醇胺A酶标二抗工作液是用酶标二抗稀释液稀释成1:2000比例；所述底物液包含0.05 mol/L的NaHPO4·12H2O、0.025 mol/L的一水柠檬酸(C6H8O7·H2O)、0.2 mmol/L的3,3,5,5‑四甲基联苯胺‑、0.5 mmol/L的过氧化氢脲和5%的N,N‑二甲基甲酰胺；所述终止液是2 mol/L的硫酸(H2SO4)；所述浓缩洗涤液是20倍浓缩洗涤液，其包含0.05%吐温‑20，0.01 mol/L的PBST，pH值范围7.0‑7.5之间；所述浓缩样品稀释液是2倍浓缩稀释液，其成分为0.01 mol/L，pH7.4磷酸盐PBS缓冲液。