[发明专利]一种具有表面拉曼增强活性的纳米星二聚体的制备方法

摘要

一种具有表面拉曼增强活性的纳米星二聚体的制备方法，属于材料化学技术领域。本发明包括金种合成，金纳米星合成，金纳米星分别修饰DNA1、DNA2，两种修饰后的金纳米星的组装，所合成的金纳米星为等离子共振体，通过互补DNA链的偶联，形成金纳米星二聚体结构；本发明提供了等离子金纳米星自组装的方法，制备出结构均一的金纳米星二聚体。

主权项

一种具有表面拉曼增强活性的纳米星二聚体的制备方法，包括金种合成，金纳米星合成，金纳米星分别修饰DNA1、DNA2，金纳米星修饰拉曼信标分子，两种修饰后的金纳米星的组装及表征，所合成的金纳米星为等离子共振体，通过互补DNA链的偶联，形成金纳米星二聚体结构；工艺步骤：（1）金种合成采用柠檬酸三钠还原氯金酸合成金种：洁净的三角烧瓶中加入48.75mL的Milli‑Q 超纯水，而后向水中加入1.25mL的浓度为4g/L的氯金酸，加热，煮沸，紧接着加入1.2mL质量浓度1%的柠檬酸三钠溶液，边加热边搅拌，溶液颜色从淡黄色变成红色，反应持续6‑8min以使柠檬酸三钠完全沉降，冷却至室温后，向溶液中加入0.3g聚乙烯吡咯烷酮，搅拌过夜使其充分包裹在金纳米粒子上，最后将该溶液以6000rpm离心40min，去上清，沉淀重悬于4mL乙醇中，即为金种溶液；（2）金纳米星粒子的合成采用种子生长法合成金纳米星：准确称取1.5g分子量10000的聚乙烯吡咯烷酮于洁净的三角烧瓶中，接着加入N,N‑二甲基甲酰胺15mL，磁力搅拌30min使聚乙烯吡咯烷酮完全溶解，然后向溶液中加入0.082mL浓度为20g/L氯金酸，磁力搅拌8min后，立即加入0.05mL由步骤（1）制备的金种溶液，搅拌20min即可制得金纳米星；（3）金纳米星与DNA1、DNA2偶联步骤（2）合成出的金纳米星粒子分别与巯基修饰的DNA1、DNA2进行偶联形成AuNS‑DNA1、AuNS‑DNA2复合体；工艺为：将步骤（2）中制备的10mL金纳米星9000rpm离心10min，浓缩至0.5mL，加入0.5mL含0.01M的SDS和0.05M NaCl的0.5×TBE溶液，混匀后4℃保藏，待用；取制备好的金纳米星的TBE溶液2份，每份各100μL，分别加入2μL 100μM的DNA1和100μM的DNA2，混匀，室温振摇反应12h；将各反应溶液在8000rpm离心5min，弃上清，沉淀用50μL的含0.01M的SDS和0.05M NaCl的0.5×TBE溶液分散沉淀，分别制得AuNS‑ DNA1与AuNS‑ DNA2复合体，4℃保藏、待用；（4）金纳米星修饰拉曼信标分子采用步骤（3）修饰好的AuNS‑ DNA1与AuNS‑ DNA2复合体分别和拉曼信标分子4‑氨基苯硫酚4‑ATP进行偶联，制得AuNS‑ DNA1‑ATP与AuNS‑ DNA2‑ATP复合体；（5）金纳米星二聚体组装及表征将步骤（4）制备出的AuNS‑ DNA1‑ATP与AuNS‑ DNA2‑ATP复合体进行杂交，形成组装结构，并对此结构进行表征：取步骤（4）中偶联好的金纳米星：AuNS‑ DNA1‑ATP与AuNS‑ DNA2‑ATP复合体各20μL，加入20μL含0.01M的SDS和0.05M NaCl的0.5×TBE溶液，振荡反应12 h；即制得金纳米星二聚体；DNA1：5’‑TAGGAATAGTTATAAAAAAAAAAAA‑3’，DNA2：5’‑TTATAACTATTCCTAAAAAAAAAAA‑3’。