[发明专利]一类调控CCR5和CXCR4基因的融合蛋白及方法

摘要

一种类转录激活因子(Transcription Activator Like Effectors，TALE)，其特征在于所述类转录激活因子(TALE)能够与人类CCR5基因活性区域或者CXCR4基因活性区域中的DNA片段识别并结合，所述人类CCR5基因活性区域一共有3个，所述CXCR4基因活性区域一共有2个。TALE与核酸内切酶连接形成融合蛋白TALEN，利用该TALEN对CCR5基因或者CXCR4基因的特定位点进行剪切，可以使得进行基因调控后的细胞具备抵御HIV病毒的能力。

主权项

一种类转录激活因子(Transcription Activator Like Effectors，TALE)，其特征在于所述类转录激活因子(TALE)能够与人类CCR5基因活性区域或者CXCR4基因活性区域中的DNA片段识别并结合，所述人类CCR5基因活性区域一共有3个，其核苷酸序列分别为：活性区域1)：tgcacagggtggaacaagatggattatcaagtgtcaagtccaatctatgacatcaattattatacatcggagccctgccaaaaaatcaatgtgaagcaaatcgcag，活性区域2)：caacatgctggtcatcctcatcctgataaactgcaaaaggctgaagagcatgactgacatctacctg，活性区域3)：tcttcattacacctgcagctctcattttccatacagtcagtatcaattctggaagaatttccagacattaaagatag；所述CXCR4基因活性区域一共有2个，其核苷酸序列分别为：活性区域1’)：TAACTACACCGAGGAAATGGGCTCAGGGGACTATGACTCCATGAAGGAACCCTGTTTCCGTGAAGAAAATGCTAATTTCAATAAAA，活性区域2’)：TAAAATCTTCCTGCCCACCATCTACTCCATCATCTTCTTAACTGGCATTGTGGGCAATGGATTGGTCATCCTGGTCATGGGTTACCAGAAGAAACTGAGAAGCATGACGGACAAGTACAGGCTGCA，若对CCR5或者CXCR4上述活性区域中的DNA片段进行切除，则待基因修复之后，HIV病毒将不能再攻击这些基因修复之后的细胞；所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域1)，其核苷酸序列为5’‑TATGACATCAATTATTAT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NI NG NN NI HD NI NG HD NI NI NG NG NI NG NG NI NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑1‑L”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域1)的反义链，其核苷酸序列为5’‑TGCTTCACATTGATTTTTT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NN HD NG NG HD NI HD NI NG NG NN NI NG NG NG NG NG NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑1‑R”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域1)，其核苷酸序列为5’‑TGGAACAAGATGGATTAT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NN NN NI NI HD NI NI NN NI NG NN NN NI NG NG NI NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑2‑L”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域1)的反义链，其核苷酸序列为5’‑TAATTGATGTCATAGAT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NI NI NG NG NN NI NG NN NG HD NI NG NI NN NI NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑2‑R”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域1)，其核苷酸序列为5’‑TATCAAGTGTCAAGTCCAAT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NI NG HD NI NI NN NG NN NG HD NI NI NN NG HD HD NI NI NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑3‑L”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域1)的反义链，其核苷酸序列为5’‑TGGCAGGGCTCCGATGTATAAT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NN NN HD NI NN NNNN HD NG HD HD NN NI NG NN NG NI NG NI NI NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑3‑R”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域2)，其核苷酸序列为5’‑TGCTGGTCATCCTCAT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NN HD NG NN NN NG HD NI NG HD HD NG HD NI NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑4‑L”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域2)的反义链，其核苷酸序列为5’‑TCATGCTCTTCAGCCTT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑HD NI NG NN HD NG HD NG NG HD NI NN HD HD NG NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑4‑R”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域2)，其核苷酸序列为5’‑TGGTCATCCTCATCCT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NN NN NG HD NI NG HD HD NG HD NI NG HD HD NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑5‑L”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域2)的反义链，其核苷酸序列为5’‑TCAGTCATGCTCTTCAGC‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑HD NI NN NG HD NI NG NN HD NG HD NG NG HD NI NN HD‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑5‑R”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域2)，其核苷酸序列为5’‑TGCTGGTCATCCTCATC‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NN HD NG NN NN NG HD NI NG HD HD NG HD NI NG HD‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑6‑L”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域3)，其核苷酸序列为5’‑TACACCTGCAGCTCTCAT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NI HD NI HD HD NG NN HD NI NN HD NG HD NG HD NI NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑7‑L”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域3)的反义链，其核苷酸序列为5’‑TGGAAATTCTTCCAGAAT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NN NN NI NINI NG NG HD NG NG HD HD NI NN NI NI NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑7‑R”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域2’)，其核苷酸序列为5’‑CTTCCTGCCCACCATCT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑HD NG NG HD HD NG NN HD HD HD NI HD HD NI NG HD NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑1’‑L”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域2’)的反义链，其核苷酸序列为5’‑GCCCACAATGCCAGTT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NN HD HD HD NI HD NI NI NG NN HD HD NI NN NG NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑1’‑R”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域1’)，其核苷酸序列为5’‑ACACCGAGGAAATGGGCTCA‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NI HD NI HD HD NN NI NN NN NI NI NI NG NN NN NN HD NG HD NI‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑2’‑L”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域1’)的反义链，其核苷酸序列为5’‑CACGGAAACAGGGTTCCTT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑HD NI HD NN NN NI NI NI HD NI NN NN NN NG NG HD HD NG NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑2’‑R”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域2’)，其核苷酸序列为5’‑ATGACTCCATGAAGGAAC‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NI NG NN NI HD NG HD HD NI NG NN NI NI NN NN NI NI HD‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑3’‑L”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域2’)的反义链，其核苷酸序列为5’‑ATTGAAATTAGCATTTT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NI NG NG NN NI NI NI NG NG NI NN HD NI NG NG NG NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑3’‑R”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域2’)，其核苷酸序列为5’‑CCTGCCCACCATCTACT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑HD HD NG NN HD HD HD NI HD HD NI NG HD NG NI HD NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑4’‑L”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域2’)的反义链，其核苷酸序列为5’‑GCCCACAATGCCAGT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NN HD HD HD NI HD NI NI NG NN HD HD NI NN NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑4’‑R”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域2’)，其核苷酸序列为5’‑CTACTCCATCATCTT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑HD NG NI HD NG HD HD NI NG HD NI NG HD NG NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑5’‑L”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域2’)的反义链，其核苷酸序列为5’‑GACCAATCCATTGCCC‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NN NI HD HD NI NI NG HD HD NI NG NG NN HD HD HD‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑5’‑R”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域2’)，其核苷酸序列为5’‑ATCCTGGTCATGGGTT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NI NG HD HD NG NN NN NG HD NI NG NN NN NN NG NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑6’‑L”；或者所述类转录激活因子(TALE)识别并结合的DNA片段来自活性区域2’)的反义链，其核苷酸序列为5’‑ACTTGTCCGTCATGCTT‑3’，所述类转录激活因子(TALE)与上述核苷酸序列单链识别并结合，其重复可变双氨基酸残基(repeat variable diresidue，RVD)序列为：N端‑NI HD NG NG NN NG HD HD NN NG HD NI NG NN HD NG NG‑C端，上述类转录激活因子(TALE)记为“TALE‑6’‑R”。