[发明专利]一种皂苷分离纯化方法

摘要

本发明提供了一种皂苷分离纯化方法。采用二维制备液相色谱从皂苷提取物中高效分离纯化皂苷单体，第一维采用反相色谱柱，第二维采用亲水色谱柱。流动相组成为乙腈、甲醇、乙醇或水，无缓冲盐添加，便于样品制备后处理。采用线性梯度、台阶梯度或等度洗脱方式。选取三七叶水提物第一维制备所得三个有代表性的馏分，通过第二维亲水色谱制备获得八个皂苷单体，其中包括两对同分异构体和一个新皂苷。该方法可以实现皂苷的目标制备，可获取批量的已知活性皂苷，同时富集分离微量皂苷，从而不断丰富皂苷库，为皂苷类化合物的活性研究和单一成分的新药开发提供物质基础。

主权项

一种皂苷分离纯化方法，其特征在于：所述二维制备液相色谱从三七叶水提物中分离纯化皂苷单体为：1)三七叶水提物先经第一维制备型高效液相色谱分离，色谱条件：色谱柱为C18TDE柱；水(A)和乙腈(B)流动相体系；洗脱梯度为0‑5min,体积浓度20％→32％B；5‑45min,体积浓度32％→68％B；45‑50min,体积浓度68％→100％B；50‑55min,100％B；流速为300mL/min；检测波长为203nm；样品溶液浓度为300mg/mL，其采用体积浓度20％乙腈‑80％水溶解；进样体积为10mL；1‑55分钟，每分钟收集一份，共计54个组分，每个组分浓缩至干后备用；2)在第一维制备所得54个组分中，皂苷主要分布在组分6到组分30共25个组分中；之后，针对这25个富含皂苷的组分进行第二维亲水色谱制备，色谱柱为酰胺柱；采用乙腈水流动相体系，根据各个组分的色谱保留特性，流动相中乙腈的体积浓度控制在60％‑95％；采用等度洗脱方式制备皂苷单体；选取组分9采用亲水色谱模式进行第二维制备型高效液相色谱分离，色谱条件：色谱柱为酰胺柱；水(A)和乙腈(B)流动相体系；体积浓度76％B等度洗脱；流速为20mL/min；检测波长为203nm；进样量为1mL；收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得P1和P2两个化合物；选取组分11采用亲水色谱模式进行第二维制备型高效液相色谱分离，色谱条件：色谱柱为酰胺柱；水(A)和乙腈(B)流动相体系；体积浓度80％B等度洗脱；流速为20mL/min；检测波长为203nm；进样量为1mL；收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得P3、P4、P5和P6四个化合物；选取组分13采用亲水色谱模式进行第二维制备型高效液相色谱分离，色谱条件：色谱柱为酰胺柱；水(A)和乙腈(B)流动相体系；体积浓度80％B等度洗脱；流速为20mL/min；检测波长为203nm；进样量为1mL；收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得P7和P8两个化合物；所述化合物的结构信息如下：化合物P1为三七皂苷FP2；化合物P2为三七皂苷Fa；化合物P3为人参皂苷Rc；化合物P4为人参皂苷Rb1；化合物P5为三七皂苷Fc；化合物P6为未知皂苷，分子量为1342，分子式为C63H106O30，R1为O‑glu(2→1)glu(2→1)xyl，R2为O‑glu(6→1)araP(4→1)xyl；化合物P7为人参皂苷Rd；化合物P8为人参皂苷Rb3。