[发明专利]农林废弃物核桃壳中酪氨酸酶抑制活性成分的制备及应用

摘要

本发明属于树木次生代谢活性成分提取分离技术领域，具体涉及一种以农林废弃物核桃壳为原料制备酪氨酸酶抑制活性成分的方法及以本方法所制备成分的酪氨酸酶抑制活性应用。本发明以核桃壳为原料，经提取、萃取、分离得到5个成分：1，2，6-三没食子酰葡萄糖、3，4，6-三没食子酰葡萄糖、2，3，4，6-四没食子酰葡萄糖、1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖及单宁酸。以本发明制备的5个成分的颜色浅、纯度高，制备方法具有操作工艺简单、成本低、周期短、适合规模化生产、可减少农林废弃物环境污染且能实现废弃物高值化利用的特点。本发明所制备的核桃壳的5个成分对蘑菇酪氨酸酶具有显著抑制作用，可用于制备酪氨酸酶抑制剂。

主权项

一种以农林废弃物核桃壳制备具有酪氨酸酶抑制活性成分的方法，其特征按顺序包括如下步骤：(1)以洗净、阴干、粉碎至粒度为20～100目的核桃壳为原料，按质量比为1∶1～1∶10加入体积百分浓度为5％～99％的丙酮水溶液，在加热或常温下以浸提或索氏提取或超临界流体提取或以微波或超声波辅助提取1～6次，每次10min～72h，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1％～10％，得到核桃壳粗提物的浓缩液；(2)加入浓缩液质量1～8倍的水，搅拌，加入浓缩液质量1～8倍的正己烷萃取1～8次，分离得正己烷萃取剩余相，向正己烷萃取剩余相加入浓缩液质量1～8倍的二氯甲烷萃取1～8次，分离得二氯甲烷萃取剩余相，向二氯甲烷萃取剩余相加入浓缩液质量1～8倍的乙酸乙酯萃取1～8次，分离得乙酸乙酯萃取剩余相，向乙酸乙酯萃取剩余相加入浓缩液质量1～8倍的正丁醇萃取1～8次，分离，得到正丁醇萃取相，将正丁醇萃取相减压浓缩、冷冻干燥，得到核桃壳正丁醇萃取相粉末；(3)将核桃壳正丁醇萃取相粉末以甲醇溶样后过常压Sephadex LH‑20凝胶柱层析，以体积比为4∶1～2∶1的甲醇∶水溶液为流动相得到B1～B5五个流分；流分B2以体积比为6∶1～3∶1的二氯甲烷∶丙酮溶液溶样，采用常压硅胶柱层析，体积比起始浓度为8∶1～6∶1中止浓度为4∶1～2∶1的二氯甲烷∶丙酮溶液梯度洗脱，得到B21～B23三个流分；以体积比为2∶1～1∶6的甲醇∶水溶液为溶样剂和洗脱液对B22流分连续进行常压Sephadex LH‑20凝胶柱层析得到化合物1；流分B3以体积比为1∶1～1∶3的甲醇∶水溶液为溶样剂和洗脱液进行常压Sephadex LH‑20凝胶柱层析，得到B31～B34四个流分；流分B33以体积比为1∶3～1∶5的甲醇∶水溶液为溶样剂和洗脱液进行常压Sephadex LH‑20凝胶柱层析，得到流分B331、B333及化合物4；流分B333以体积比为2∶1～1∶4的乙醇∶正己烷溶液为溶样剂和洗脱液连续进行常压Sephadex LH‑20凝胶柱层析，得到化合物3；流分B4以体积比为7∶2∶1的二氯甲烷∶甲醇∶水溶液为溶样剂和洗脱液进行常压硅胶柱层析，得到流分B42、B43及化合物5；流分B42以体积比为2∶1～1∶2的甲醇∶水溶液为溶样剂和洗脱液进行常压Sephadex LH‑20凝胶柱层析，得B421～B423三个流分；流分B422以体积比为1∶3～3∶1的乙醇∶正己烷溶液为溶样剂和洗脱液连续进行常压Sephadex LH‑20凝胶柱层析，得到化合物2。