[发明专利]肝素酶Ⅲ的固定化方法有效
申请号: | 201210423099.7 | 申请日: | 2012-10-30 |
公开(公告)号: | CN102888390A | 公开(公告)日: | 2013-01-23 |
发明(设计)人: | 马小来;白佳珂;史绍鹏;李锂 | 申请(专利权)人: | 深圳市海普瑞药业股份有限公司 |
主分类号: | C12N11/10 | 分类号: | C12N11/10 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 518057 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明涉及一种肝素酶Ⅲ的固定化方法,尤其涉及一种以壳聚糖微球为固定化材料,对肝素酶Ⅲ进行固定化的方法。肝素酶Ⅲ固定化以后具有可回收、可重复利用、酶与底物和产物易分离等优越性。 | ||
搜索关键词: | 肝素 固定 方法 | ||
【主权项】:
一种肝素酶Ⅲ的固定化方法,包括下述步骤:(1)肝素酶Ⅲ溶液的制备:选择Tris‑HCl缓冲液(pH7.0,含CaCl2)作为肝素酶Ⅲ的溶剂,将肝素酶Ⅲ溶解在该缓冲液中,制得酶溶液;(2)肝素酶Ⅲ与壳聚糖微球的交联:将壳聚糖微球用Tris‑HCl缓冲液(pH 7.0, 含10mM CaCl2)充分溶胀,再取步骤(1)获得的肝素酶Ⅲ溶液 ,将其加入该壳聚糖微球中,进行交联;(3)用乙酸‑乙酸钠(pH 6.5‑8.0,含NaCl)和Tris‑HCl(pH 6.5‑8.0,含CaCl2和NaCl)两种缓冲液分别洗涤上述交联后的壳聚糖微球,至洗脱液无酶活性;(4)利用还原剂处理步骤(3)中获得的固定了肝素酶Ⅲ的壳聚糖微球,随后,如果需要,除去残余的还原剂,由此得到固定在壳聚糖微球上的肝素酶Ⅲ。
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