[发明专利]一种脂多糖的纯化方法

摘要

本发明涉及一种脂多糖的纯化方法，属于生物技术领域，其步骤为：经超滤浓缩、疏水层析、离子交换层析纯化后获得纯度较高的脂多糖。本发明提供了一种纯化效果好、有利于产业化的脂多糖纯化新方法，纯化后的脂多糖核酸和蛋白含量均低于1%，适合于制备疫苗。

主权项

一种脂多糖的纯化方法，包括以下步骤：（1）脂多糖的纯化：①第一次超滤：将脂多糖用0.01～0.5mol/L氯化钙溶液溶解，离心收集上清，上清液采用10～300KD超滤膜，用0.01～0.5mol/L氯化钙溶液超滤得超滤浓缩液1，超滤时所用的氯化钙溶液的体积为上清液体积的10～30倍；②疏水层析：超滤浓缩液1中加入硫酸铵溶液至硫酸铵终浓度为1～3mol/L，于4～12℃、3000～8000rpm条件下离心15～60min，收集上清液；上样于疏水层析柱，用混合液1或混合液2淋洗疏水层析柱，收集疏水层析穿透峰，得疏水层析液，混合液1由Tris‑HCl和硫酸铵混合而成，pH为5.0～8.0，混合液1中Tris‑HCl的终浓度为0.005～0.5mol/L，硫酸铵的终浓度为0.5～2.0 mol/L；混合液2由磷酸盐缓冲液和硫酸铵混合而成，pH为5.0~8.0，混合液2中磷酸盐的终浓度为0.005～0.5mol/L，硫酸铵的终浓度为0.5～2.0 mol/L； ③第二次超滤：将疏水层析液采用10～50KD超滤膜，用注射用水超滤得超滤浓缩液2，所述的注射用水的用量为疏水层析液体积的3～7倍；④离子交换层析：在超滤浓缩液2中加入Tris‑HCl缓冲液至Tris‑HCl的终浓度为0.005～0.5mol/L得混合液3，混合液3的pH为5.0~8.0；将混合液3上样于阴离子交换柱，用终浓度为0.005～0.5mol/L 、pH为5.0~8.0的Tris‑HCl缓冲液淋洗阴离子交换层析柱至紫外吸光值不再下降，再用洗脱液洗脱，收集洗脱峰即为目标物溶液，所述的洗脱液由Tris‑HCl和盐混合而成，洗脱液的pH为5.0～8.0，洗脱液中Tris‑HCl的终浓度为0.005～0.5mol/L、盐的终浓度为0.001~1 mol/L；或在超滤浓缩液2中加入磷酸盐缓冲液至磷酸盐的终浓度为0.005～0.5mol/L得混合液4，混合液4的pH为5.0~8.0，将混合液4上样于阴离子交换柱，用终浓度为0.005～0.5mol/L，pH为5.0~8.0的磷酸盐缓冲液淋洗阴离子交换层析柱至紫外吸光值不再下降，再用洗脱液洗脱，收集洗脱峰即为目标物溶液，所述的洗脱液由磷酸盐和盐混合而成，洗脱液的pH为5.0~8.0，洗脱液中磷酸盐的终浓度为0.005～0.5mol/L、盐的终浓度为0.001~1 mol/L；（2）目标物溶液的浓缩干燥：将目标物溶液采用10～50KD超滤膜，用注射用水超滤缩液，真空干燥即得纯化的脂多糖，注射用水的用量为目标物溶液体积的3～7倍。