[发明专利]一种断端对接式发夹型DNA探针构建方法无效
申请号: | 201210431507.3 | 申请日: | 2011-02-28 |
公开(公告)号: | CN103243154A | 公开(公告)日: | 2013-08-14 |
发明(设计)人: | 陈庆海 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/10 |
代理公司: | 北京瑞盟知识产权代理有限公司 11300 | 代理人: | 赵秉森 |
地址: | 400038 重*** | 国省代码: | 重庆;85 |
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摘要: | 本发明公开了一种断端对接式发夹型DNA探针的构建方法,包括(1)构建断端对接式发夹型DNA探针的主链,其中主链包括依次相连的第一茎序列、环序列、第二茎序列、延长臂序列,其中环序列是与靶序列完全匹配的碱基序列,两茎序列互补结合;(2)构建辅链,辅链是与所述延长臂序列互补结合的单链核酸;在辅链上、与第一茎序列相近的末端修饰有与上述荧光分子或淬灭分子相对应的淬灭分子或荧光分子,(3)结合主、辅链形成荧光-淬灭分子对。本发明克服了中间修饰存在的高技术难度和修饰昂贵的技术缺陷,通过互补双链核酸断端对接,使荧光素和淬灭素紧邻,使荧光共振能量转移(FRET)现象得以变位实现。 | ||
搜索关键词: | 一种 对接 发夹 dna 探针 构建 方法 | ||
【主权项】:
一种断端对接式发夹型DNA探针构建方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)构建断端对接式发夹型DNA探针的主链,包括依次相连的第一茎序列、环序列、第二茎序列、延长臂序列,其中环序列是与靶序列完全匹配的碱基序列,两茎序列碱基互补且互补结合;第一茎序列的一端与环序列相连,另一端修饰荧光分子或淬灭分子,延长臂序列的一端与第二茎序列相连,另一端修饰用于与生物载体表面相固定的固定基团;(2)构建断端对接式发夹型DNA探针的辅链,是与所述延长臂序列完全碱基互补的单链核酸;将辅链的预设相近末端修饰与步骤(1)中的荧光分子或淬灭分子相对应的淬灭分子或荧光分子; (3)将上述主、辅链互补结合,最后用软件验证生成物的发夹结构,并经genbank比对,验证合格后即完成断端对接式发夹型DNA探针。
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