[发明专利]一种蝙蝠蛾拟青霉胞外酸性糖蛋白的制备方法

摘要

本发明涉及一种蝙蝠蛾拟青霉胞外酸性糖蛋白的制备方法。该方法包括：通过蝙蝠蛾拟青霉菌株的一级种子培养，接种发酵，获得蝙蝠蛾拟青霉发酵液，所得的发酵液经过乙醇沉淀、去离子水复溶、脱蛋白、冷冻干燥、DEAE-52柱层析等工序分离出蝙蝠蛾拟青霉胞外酸性糖蛋白。本发明的工艺方法具有工艺简单、提取条件温和、成本低、对环境友好，易于工业化生产等优点，所得到的蝙蝠蛾拟青霉胞外酸性糖蛋白可用作药品和保健食品原料。

主权项

一种蝙蝠蛾拟青霉胞外酸性糖蛋白的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：(1)从保存于土豆斜面培养基的母种中挖取菌丝体块(大小为0.5cm×0.5cm)，接种于种子培养基中(每只250mL三角瓶装种子培养基100mL)，于17℃下静止培养12小时后，120rpm下振荡培养培养72小时，即可获得种子液。种子培养基(g/L)：蔗糖30.00，酵母膏6.00，磷酸二氢钾1.50，硫酸镁0.50，麦芽汁10.00，土豆汁10.00，pH6.5。(2)取步骤(1)中的种子液接种到发酵培养基中(每只500mL三角瓶装发酵培养基200mL)，接种量为1％(V/V)，于17℃下静止培养12小时后，120rpm下振荡培养培养120小时后，将发酵产物离心分离(离心分离条件：4000rmp，15min)获得蝙蝠蛾拟青霉发酵液。发酵培养基配方(g/L)：蔗糖50.86，酵母膏2.00，硫酸铵6.61，磷酸二氢钾1.36，硫酸镁0.05，土豆汁15.00，麦芽汁15.00，pH6.5；(3)将步骤(2)中获得的蝙蝠蛾拟青霉发酵液，50℃减压浓缩至原体积的1/2，加3倍体积的无水乙醇，沉淀12小时，用80％乙醇洗涤3次后，离心分离(离心分离条件：4000rmp，15min)，获得胞外粗多糖。(4)将步骤(3)制得的胞外粗多糖通风挥去乙醇，加少量去离子水复溶后，用Sevag法(氯仿∶正丁醇＝4∶1)脱蛋白3次后，将水相溶液冷冻干燥获得粗多糖冷冻干粉。(5)将步骤(4)所得粗多糖溶解后，上样于DEAE‑52纤维素柱，并分别用去离子水、0.1mol/LNaCl和0.3mol/L NaCl进行洗脱，将收集的0.3mol/L NaCl洗脱组分进行减压浓缩，去离子水透析72小时，浓缩后冷冻干燥，即得到酸性糖蛋白组分。制备的酸性糖蛋白为灰白色粉末，其中多糖含量80.56％，蛋白质含量18.76％。(6)将步骤(5)所得酸性糖蛋白用分子排阻色谱检测其分子量分布情况，用红外光谱分析特征基团组成，用紫外光谱扫描确定其是否具有蛋白质组分。