[发明专利]快速制备人外周血淋巴细胞早熟凝集染色体的方法

摘要

本发明涉及快速制备人外周血淋巴细胞早熟凝集染色体的方法，其主要步骤包括：(1)、血样经植物凝血素处理后置于37℃恒温培养箱内静置45-90分钟；(2)、将植物血凝素处理后的血样中淋巴细胞置于含有秋水仙素、ATP、5％胎牛血清、CalyculinA以及CDK1/CyclinB的混合培养液中37℃培养3-12小时；(3)、细胞混合培养后，使用0.075mol KCl低渗10-20分钟；(4)、向含有低渗处理细胞的低渗液中加入固定液预固定1次，再加入固定液固定2次，每次固定10-15分钟，最后将细胞悬于固定液中。本发明与常规早熟凝集染色体制备方法相比，大大缩短了时间，仅需要3-12小时。

主权项

快速制备人外周血淋巴细胞早熟凝集染色体的方法，其特征包括如下步骤：(1)、植物凝血素处理：采集3‑5ml血样，向血样中加入植物凝血素至终浓度80‑120μg/ml，混匀后置于37℃恒温培养箱内静置45‑90分钟；(2)、混合培养：将植物血凝素处理后的血样离心，取中层分界处的淋巴细胞，置于含有250μg/ml秋水仙素、10mmol/L ATP、5％胎牛血清、500nmol/L CalyculinA以及0.2mg/ml CDK/CyclinB的混合培养液中，混匀后置于37℃恒温培养箱内静置培养3‑12小时；(3)、细胞低渗处理：细胞混合培养后，离心弃上清，使用0.075molKCl3‑5ml低渗10‑20分钟；(4)、细胞固定：向含有低渗处理细胞的低渗液中加入0.5‑1ml固定液预固定，混匀后立即离心弃上清，再加入4‑6ml固定液固定2次，每次固定10‑15分钟后离心弃上清，最后将细胞悬于0.5‑1ml固定液中；其中固定液是甲醇与冰醋酸按体积比为3∶1配制。