[发明专利]一种从猕猴桃叶片中提取RNA的方法

摘要

本发明公开了一种从猕猴桃叶片中提取RNA的方法，该方法包括（1）猕猴桃叶片的前处理，用异硫氰酸胍的酒精溶液去除猕猴桃叶片中的多糖、多酚类杂质，避免多糖、多酚类物质对猕猴桃RNA提取的影响，（2）猕猴桃叶片中总RNA的提取，（3）猕猴桃RNA的纯化。利用本发明方法提取猕猴桃叶片中的RNA，可有效去除叶片中多糖、多酚类物质对猕猴桃RNA提取的影响，使提取的猕猴桃RNA纯度高、品质好并保持较好的完整性。

主权项

一种猕猴桃叶片中RNA的提取方法，其特征在于包含以下几个步骤：（1）猕猴桃叶片的前处理。将刚摘取的猕猴桃叶片剪碎后，立即投入质量分数为2％－4％的异硫氰酸胍的50％－80％的乙醇溶液中，猕猴桃叶片与溶液的质量体积比为1：50－1：200，常温下浸提1－3小时。（2）猕猴桃总RNA的提取。将RNA提取缓冲液于55－75℃水浴锅中温育30 ‑40分钟，立即取上述处理的叶片加缓冲液于研钵中快速研磨（叶片与缓冲液的质量体积比为1：10－1：30）。把研磨好的，成粘稠状的匀浆液移入离心管中，55－75℃温育5－15 分钟，加入等体积的氯仿和异戊醇的混合溶液（混合溶液中氯仿和异戊醇的体积比为20 : 1－30：1），上下剧烈震荡10‑90秒，然后于0－20℃、5000－20000 g，离心5－60分钟。取上清，重复上述抽提步骤2－4次。取上清，加入上清液1/5－1/2体积的5－15M LiCl溶液并混匀，‑10℃－‑50℃条件下放置10‑20 小时，使RNA沉淀。0－20℃、5000－20000 g，离心5－60分钟，弃上清，获粗提的总RNA沉淀。（3）猕猴桃RNA的纯化。加入DEPC处理过的水溶解上述得到的总RNA（水与总RNA的体积质量比为5:1‑20:1），再加入DEPC处理过的水1/30－1/3体积的1－10 M NaAc，1－10体积的90 %－98％的乙醇。置于‑5℃－‑50℃，1‑5小时，使RNA沉淀。0－20℃，5000－20000 g，离心5－60分钟，弃上清，用50%－95％乙醇清洗沉淀，空气中干燥后即得RNA。