[发明专利]微生物菌群结构的快速定性与定量方法及其在中国白酒生产中的应用

摘要

本发明涉及一种微生物菌群结构的快速定性与定量方法及其在中国白酒生产中的应用，属于生物工程技术领域。本发明公开了针对于酵母、细菌、霉菌的分离鉴别培养基，并通过酵母、细菌、霉菌在鉴别培养基上的特殊菌落形态来对微生物进行定性分析，通过对特定菌落形态微生物的计数来对不同类微生物进行定量分析，本微生物菌群结构的快速定性与定量方法可分析混合微生物发酵系统中酵母、细菌、霉菌这三类微生物的群落结构及其演变规律。本发明可用于各种食品酿造微生物的混合发酵系统中微生物菌群结构的分析。

主权项

一种分析微生物菌群结构的方法，其特征在于，所述分析的微生物菌群结构为多微生物发酵系统的菌落结构，将样品与无菌水混合后，稀释涂布鉴别培养基培养：（a）酵母鉴别培养基中含以g/L计：葡萄糖：20～80；酵母膏：5～10；蛋白胨：5～10；氯化钾：0.1～0.5；氯化锰：0.001～0.01；氯化钙：0.1～0.5；硫酸镁：0.1～0.5；硫酸铁：0.001～0.01；硫酸铜：0.02～0.05；百里酚蓝：0.01～1；溴甲酚绿：0.01～1；琼脂：15～20；4～30℃培养2～6天；（b）细菌鉴别培养基中含以g/L计：牛肉膏：5～10；酵母膏：10～20；蛋白胨：10～30；氯化钠：5～10；硫酸铁：0.001～0.01；氯化锰：0.001～0.01；琼脂：15～20；溴甲酚紫：0.01～0.5；25～37℃培养1～3天；（c）霉菌鉴别培养基中含以g/L计：牛肉膏：5～10；蛋白胨：5～10；葡萄糖10～50；硫酸镁：0.5～1.0；硫酸锰：0.001～0.01；孟加拉红：0.01～0.5；溴酚红：0.01～0.5；氯霉素：0.01～0.5；琼脂：15～20；25～35℃培养2～5天；包括如下鉴别步骤：（1）采用分子方法对酵母、细菌、霉菌三类微生物进行种属鉴定，其中，对酵母26srDNA序列，细菌16srDNA序列，霉菌18srDNA序列进行测序并与数据库比对，建立鉴定微生物的种属的对应关系；（2）通过微生物在鉴别培养基上的形态来鉴别微生物的种属；细菌类：Bacillus licheniformis如图1中B1形态，Bacillus amyloliquefaciens如图1中B2形态，Bacillus subtilis如图1中B3形态，Staphylococcus saprophyticus如图1中B4形态，Bacillus cereus如图1中B5形态，Paenibacillus lactis如图1中B6形态，Paenibacillus cineris如图1中B7形态，Brevibacillus borstelensis如图1中B8形态；Bacillus tequilensis如图1中B9形态，Staphylococcus lentus如图1中B10形态，Bacillus marisflavi如图1中B11形态，Bacillus oleronius如图1中B12形态；酵母类：Saccharomyces cerevisiae如图2中Y1形态，Pichia membranifaciens如图2中Y2形态，Zygosaccharomyces bailii如图2中Y3形态，Rhodotorula mucilaginosa如图2中Y4形态，Schizosaccharomyces pombe如图2中Y5形态，Issatchenkia orientalis如图2中Y6形态；Geotrichum candidum如图2中Y7形态，Pichia anomala如图2中Y8形态，Pichia manshurica如图2中Y9形态；霉菌类：Rhizopus microsporus如图3中F1形态，Aspergillus fumigatus如图3中F2形态，paecilomyces varioti如图3中F3形态，Aspergillus flavus如图3中F4形态；Aspergillus oryzae如图3中F5形态，Aspergillus niger如图3中F6形态；（3）并通过对特定菌落形态微生物的计数来对不同类微生物进行定量分析。