[发明专利]一种大量制备2-O位脱硫酸基酶、3-O位硫酸基转移酶的方法无效
| 申请号： | 201210464123.1 | 申请日： | 2012-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN102899307A | 公开（公告）日： | 2013-01-30 |
| 发明（设计）人： | 陈敬华;周斌;刘卫超;王敏;程咏梅;滕丽萍;邓超 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N9/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明利用实验室保藏的分别携带2-O位脱硫酸化酶基因、3-O位硫酸基转移酶基因的两种质粒，首先通过转化得到重组工程菌；然后在摇瓶中优化了重组菌的生长和诱导产酶等条件，得到大量的2-O位脱硫酸化酶与3-O位硫酸基转移酶；最后将粗酶通过镍柱(Ni-NTA Agarose Fast Flow)进行纯化，快速得到了纯度高达90％的纯酶。在摇瓶优化的基础上，进行高密度发酵，采用提高单位体积菌体浓度的方法进一步提高了两种酶的产量，能够极大地降低两种酶的生产成本，使工业化成为可能，为我们探索和研究肝素多糖的构效关系、硫酸乙酰肝素的作用奠定基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 大量 制备 脱硫 酸基酶 硫酸 转移酶 方法 | ||
【主权项】：
一种大量制备2‑O位脱硫酸化酶、3‑O位硫酸基转移酶的方法，是利用实验室保藏的分别携带2‑O位脱硫酸化酶基因、3‑O位硫酸基转移酶基因的两种质粒，首先通过转化得到大肠杆菌重组工程菌；然后在摇瓶中进行了两种重组菌产酶条件的优化，得到了最佳的诱导前菌体浓度、诱导剂IPTG.浓度、诱导温度、诱导时间，同时制备了大量的2‑O位脱硫酸化酶与3‑O位硫酸基转移酶；最后将粗酶通过镍柱(Ni‑NTA Agarose Fast Flow)进行纯化，快速得到了纯度高达90％的纯酶；在摇瓶优化的基础上，将工程菌接种到高密度发酵培养基中进行高密度发酵，采用提高单位体积菌体浓度的方法进一步提高了两种酶的产量。
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