[发明专利]一种麦饭石载体海参抗溶藻弧菌剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种麦饭石载体海参抗溶藻弧菌剂的制备方法，其包括以下步骤：增菌、洗涤后收集菌体；再经β-丙内脂灭活处理后于37℃放置2小时使其水解；再喷雾干燥到营养饲料中，干燥24~36h，灭活产物与营养饲料总重量比为1：2~10，再与麦饭石以1:1~4的质量比混合，制得麦饭石载体海参抗溶藻弧菌剂；利用本发明实施例所述方法配制的麦饭石载体海参抗溶藻弧菌剂，适用于海参的育苗池和养成池；处理过程简单，耗时少；制备成本低于传统方法，本发明粉剂保存时间长，无污染。本发明对解决大批量海参养殖的溶藻弧菌的防治具有重要的现实意义。

主权项

一种麦饭石载体海参抗溶藻弧菌剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）增菌：从溶藻弧菌标准菌株的单一菌落中，挑取一菌环，接种到营养肉汤培养基中，3‑5%的体积比接种，进行发酵，32~37℃培养24~48h，至菌悬液菌含量的终浓度为10⁷~10¹⁰cfu/g；制得发酵产物；（2）洗涤：将步骤（1）获得的发酵产物，以1:50的质量比与PBS缓冲液混合，充分搅拌1~5min后，以4000~8000rpm转数离心2~5min，以收集菌体；（3）灭活处理：在收集的菌体中，按1:50的质量比加入PBS缓冲液，再向混合液体中，按1：1000~4000重量比加入β‑丙内脂，100rmp振摇条件下，于4℃放置24h，然后于37℃放置2小时使其水解；（4）干燥：上述步骤（3）所得的灭活产物喷雾干燥到营养饲料中，干燥24~36h，灭活产物与营养饲料总重量比为1：2~10，产物水份含量为2~5%，制得海参用抗溶藻弧菌营养增强剂；所述的营养饲料为：黄粉虫沙50～70份；马尾藻粉：25～40份；海蒿子15～35；大豆蛋白10～15份；鱼粉：5～10份；螺旋藻2～5份；贻贝粉2～5份；低聚壳聚糖：1～4份；复合多维1～4份；复合多矿1～4份；（5）向步骤（4）所得到的海参用抗溶藻弧菌营养增强剂中，按照1:1~4的质量比，加入麦饭石，充分混合均匀后球磨，球磨条件为：按10~30：1的质量比装入钢球和沉淀物；球磨转速设为350~450r/min，球磨时间为2~4h，使得终产物的产品粒度为纳米级~微米级。