[发明专利]一种纯化硫代寡核苷酸的工业化方法

摘要

一种纯化硫代寡核苷酸的工业化方法，包括自动液相层析仪和离子交换纯化柱，流动相自动切换系统、在线紫外监测器和pH监测器；纯化层析体系选择；步骤包括：原料液处理，在线监测，上样、分离、洗脱，目的组分收集，纯化柱为直径100mm，装填层析填料1000ml；流动相组成：A：20mM氢氧化钠水溶液；B：20mM氢氧化钠+2.5M氯化钠水溶液；步骤(2)选择紫外波长为290nm；步骤(3)上样量为上样原料液150ml；其分步骤为：①A液平衡层析柱；②用80%-60%A液、20％-40％的B液洗脱；③用60%-20%A液、40％-80％的B液进行洗脱；④用20%A液、80％的B液洗脱；步骤（4）纯度＞95％以上的样品组分进入后续脱盐工序，产率达70％，纯度大于95％。

主权项

一种纯化硫代寡核苷酸的工业化方法，生产设备包括自动液相层析仪和离子交换纯化柱，自动液相层析仪配有多元梯度泵、流动相自动切换系统、在线紫外监测器和pH监测器；包括纯化层析体系选择；生产步骤包括：⑴原料液处理，⑵在线监测，⑶上样、分离、洗脱，⑷目的组分收集，其特征在于：自动液相层析仪器的纯化柱为直径100mm的不锈钢柱，装填层析填料1000ml；流动相组成：A：20mM氢氧化钠水溶液、B：20mM氢氧化钠+2.5M氯化钠水溶液；生产步骤(2)起动纯化仪，开始在线监测，选择紫外监测器的紫外波长为290nm；步骤(3)上样、分离、洗脱：每次纯化上样量为上样原料液150ml；其分步骤为：分步骤①用液量为1个层析柱体积的流动相A液平衡层析柱，然后以100ml/min快速上样；分步骤②用80%‑60%流动相A液、20％－40％的流动相B液进行洗脱，液量为6个层析柱体积，洗脱过程流速为120ml/min；分步骤③用60%‑20%流动相A液、40％－80％的流动相B液进行洗脱，液量为4个层析柱体积，同时开始分段收集紫外最大吸收峰处的洗脱液，洗脱过程流速为120ml/min；分步骤④用20%流动相A液、80％的流动相B液进行洗脱，液量为1个层析柱体积，洗脱过程流速为120ml/min；步骤（4）生产中分段收集的各组分，经高效液相色谱测定，纯度＞95％以上的样品组分可混合进入后续脱盐工序，最终得到目的产物。