[发明专利]基于全爪螨几丁质基因的双靶标转基因载体的制备方法有效
| 申请号： | 201210492338.4 | 申请日： | 2012-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN103014059A | 公开（公告）日： | 2013-04-03 |
| 发明（设计）人： | 冉春;张云飞;刘浩强;陈飞;李鸿筠;李俊丽;李晓姣;岳建书 | 申请（专利权）人： | 冉春 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/113;C12N15/66;A01H5/00 |
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| 地址： | 400712 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种同时应用2种几丁质酶基因的方法。从柑橘全爪螨转录组数据库鉴定出2条几丁质酶基因Unigene10731和Unigene7021，进行真实性检测后，将选出的两个基因在NCBI上进行比对，找出保守序列，根据多基因大片段构建策略将两个基因拼接成一个多基因片段，将Unigene10731与Unigene7021拼接在一起作为一个多基因。设计含有酶切位点的引物，将正、反向多基因几丁质酶目的片段先后插入到载体内含子两端，从而构成反向互补发卡结构的RNAi干扰载体“PFGC+Ug10731/Ug7021”，将载体转载于农杆菌中对柑橘苗木进行侵染。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 全爪螨 几丁质 基因 靶标 转基因 载体 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种基于柑橘全爪螨几丁质基因的双靶标转基因载体的制备方法，其特征在于，该制备方法首先从柑橘全爪螨转录组数据库鉴定出2条几丁质酶基因Unigene10731和Unigene7021，进行真实性检测后，将选出的两个基因在NCBI上进行比对，找出保守序列，根据多基因大片段构建策略将两个基因拼接成一个多基因片段，将Unigene10731与Unigene7021拼接在一起作为一个多基因；设计含有酶切位点的引物，将正、反向多基因几丁质酶目的片段先后插入到载体内含子两端，从而构成反向互补发卡结构的RNAi干扰载体“PFGC+Ug10731/Ug7021”，将载体转载于农杆菌中对柑橘苗木进行侵染。
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