[发明专利]防治Ⅰ型和Ⅲ型鸭病毒性肝炎的二价蛋黄抗体的制备方法

摘要

本发明公开了一种防治Ⅰ型和Ⅲ型鸭病毒性肝炎的二价蛋黄抗体的制备方法，本发明制备的Ⅰ型和Ⅲ型鸭病毒性肝炎二价蛋黄抗体能针对Ⅰ型和Ⅲ型鸭病毒性肝炎单一感染及混合感染进行有效的防治，解决现有疫苗及血清抗体、卵黄抗体对混合感染治疗无效的困境；同时本发明采用辛酸沉淀法提取Ⅰ型和Ⅲ型鸭病毒性肝炎二价蛋黄抗体，该法安全、价格低廉，适于大规模生产，且制备的蛋黄抗体纯度高、效价高、性质稳定、易于保存。

主权项

一种防治Ⅰ型和Ⅲ型鸭病毒性肝炎的二价蛋黄抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤： 1）制备Ⅰ型和Ⅲ型鸭病毒性肝炎的二价高免鸡蛋； （1）选择健康高产蛋鸡隔离饲养，加强饲料营养，同时加喂专用抗生素制剂以预防细菌感染； （2）制备Ⅰ型和Ⅲ型鸭肝炎病毒二价灭活苗； A.制水相； 用冷冻保存的Ⅰ型和Ⅲ型鸭病毒性肝炎毒种稀释后分别接种10日龄鸭胚，24‑72h后分别无菌采集死亡鸭胚胚体及胚液，匀浆，冻融后离心，取上清液，等体积混合制成病毒液并对其进行灭活处理，取灭活后的病毒液与无菌吐温‑80进行混合后制成水相； B.制油相； 取白油、司本‑80和硬脂酸铝，并将三种混合，搅拌均匀后，高压灭菌后制成油相； C.制备油乳剂灭活苗； 将上述步骤1‑（2）‑A所制得的水相和步骤1‑（2）‑B所制得的油相进行混匀即得； （3）免疫产蛋鸡，制备高免鸡蛋； 将步骤1‑（2）所制备的二价灭活苗免疫步骤1‑（1）处理过的高产蛋鸡，进行免疫程序，待效价检测均达到要求后收集鸡蛋，即为Ⅰ型和Ⅲ型鸭病毒性肝炎的二价高免鸡蛋； 2）利用步骤1制备的Ⅰ型和Ⅲ型鸭病毒性肝炎的二价高免鸡蛋制备蛋黄抗体； （1）分离高免鸡蛋蛋黄； 将步骤1制备的高免鸡蛋进行消毒程序，然后送入蛋清蛋黄分离机进行蛋黄分离； （2）提取卵黄抗体； 将步骤2‑（1）所分离的蛋黄用TBS作为缓冲液，将蛋黄液稀释8倍后，加入0.2%的辛酸，沉淀脂类，蛋黄抗体保留在上清液中；再将40%甲醛溶液与该上清液混合，使甲醛的终浓度达到0.1%（V/V），对其进行过滤操作后，取滤液4℃保存备用； （3）配制、保存； 将步骤2‑（2）所得滤液进行Ⅰ型和Ⅲ型鸭肝炎病毒抗体效价测定，用0.01M、pH7.2的无菌PBS稀释至中和抗体效价为1:320；然后加入终浓度为0.01%（V/V）的吐温‑80作为稳定剂，搅拌均匀后进行无菌定量分装。