[发明专利]嗜水气单胞菌核酸标准品的制备方法

摘要

本发明公开一种嗜水气单胞菌核酸标准品的制备方法，其通过将提取的嗜水气单胞菌ATCC35654和/或ATCC 7966的基因组核酸经冷冻干燥后获得，其中所述的冷冻干燥条件为：启动冻干机，当干燥室温度降至-35℃时开启冷却阱；冷却阱温度降至-40℃时，将在-80℃预冻2h的核酸样品放入干燥室后抽真空；待真空度降至0.5Torr结束冷冻；并将样品于15℃干燥，当真空度降至0.1Torr时，取出样品，盖紧西林瓶获得基因组核酸标准样品，于-20℃中避光贮存。本发明产品适用于水生动物的疾病预防；制备成本低，保存时间长，无污染。对解决大批量水生动物养殖的嗜水气单胞菌的防治具有重要的现实意义。

主权项

一种嗜水气单胞菌核酸标准品的制备方法，其特征在于，其包括下述步骤：（1）增菌：从嗜水气单胞菌标准菌株接种到LB培养基中，进行发酵，37℃培养12h制得发酵产物；将发酵产物再接入嗜水气单胞菌培养基中进行发酵，32~37℃培养24~48h，至菌悬液菌含量的终浓度为107~1010cfu/g；所述的嗜水气单胞菌培养基配制方法：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，葡萄糖5g，无需调节pH，121℃下灭菌20min；（2）洗涤：将步骤（1）获得的菌悬液重复下述清洗操作2~5次，以1:10的体积比与PBS缓冲液充分混合，在8000～12000rpm条件下离心5~10min，收集菌体；（3）采用CTAB法提取菌悬液DNA，将提取的DNA用pH8.0的TE溶液溶解，于西林瓶中分装核酸样品；（4）冷冻干燥：启动冻干机，当干燥室温度降至‑35℃时开启冷却阱；冷却阱温度降至‑40℃时，将在‑80℃预冻2h的核酸样品放入干燥室后抽真空；待真空度降至0.5Torr结束冷冻；并将样品于15℃干燥，当真空度降至0.1Torr时，取出样品，盖紧西林瓶获得基因组核酸标准样品，于‑20℃中避光贮存。