[发明专利]一种新城疫、禽流感二联灭活疫苗的制备方法

摘要

本发明涉及一种新城疫、禽流感二联灭活疫苗的制备方法，其包括以下步骤：接种、鸡胚后孵化、病毒液的浓缩、病毒液的灭活和乳化即得新城疫、禽流感二联灭活疫苗。本发明通过在接种时采用连续注射器配磁力搅拌器进行接种，提高效率，减少种毒效价的损失；浓缩采用密理博快速切向流浓缩设备，提高浓缩效率，减少浓缩过程中的效价损失；灭活剂采用β-丙内酯，无残留，无毒害，使用后无不良反应的灭活剂。

主权项

一种新城疫、禽流感二联灭活疫苗的制备方法，其特征在于：其包括以下步骤：1)接种：分别将新城疫病毒与禽流感病毒种毒用灭菌生理盐水稀释10‑4‑10‑5倍后分别置于种毒瓶中，接种时，种毒瓶置于磁力搅拌器上，用连续注射器分别接种9‑10日龄易感鸡胚尿囊腔内，每胚0.1mL；2)鸡胚后孵化：将接种后的鸡胚置37℃的温室中分别培养96‑120h后，用真空泵管道收苗器分别收获接种新城疫病毒与禽流感病毒后规定时间内存活及死亡的鸡胚液，得新城疫病毒液和禽流感病毒液；3)病毒液的浓缩：将两种病毒液在无菌的条件下，分别用密理博快速切向流浓缩设备浓缩，直至将新城疫病毒液浓缩至病毒含量≥108.7EID50/0.1mL，禽流感病毒液浓缩至病毒含量≥108.3EID50/0.1mL；4)病毒液的灭活：浓缩后的两种病毒液，分别加入病毒液体积分数0.025‑0.1%的β‑丙内酯溶液，分别于灭活罐内灭活；在灭活罐内液体温度4℃灭活24h，然后升温至37℃水解4‑6h；水解完成后分别将灭活的病毒液置于2‑8℃保存；5)乳化：将灭活的新城疫病毒液与禽流感病毒液等量混合得混合灭菌胚液，取吐温‑804份装入容器中高压灭菌，冷却至常温后加入混合灭菌胚液96份，充分摇动直到吐温‑80完全溶解，即得水相；取注射用白油94份、司本‑806份，混合后，加硬脂酸铝2份，边加边搅拌，在罐体内进行高压灭菌，即得油相；将所述的水相与油相以体积比1:2‑3混合乳化，即得成品。