[发明专利]宫膜干细胞的规模化生产工艺

摘要

本发明提供一种宫膜干细胞规模化生产工艺，包括：（1）宫膜干细胞的分离提取和原代培养；（2）宫膜干细胞的培养扩增：（3）宫膜干细胞的大规模培养：（4）宫膜干细胞的检测；（5）宫膜干细胞的冷冻保存；（6）长期冷冻保存，定期进行复苏检测。本发明由育龄期妇女的月经血中获得宫膜干细胞，利用体外培养扩增方法，短期内获得较多数量富有功能活性的高质量宫膜干细胞，经检测合格后，长期冷冻保存在-196℃的环境中，为未来的临床以及科研提供大量的宫膜干细胞资源，具有极大的社会价值和意义。

主权项

一种宫膜干细胞规模化生产工艺，包括以下步骤：（1）宫膜干细胞的分离提取：月经血经密度梯度离心后，在含胎牛血清细胞培养液的培养器皿中，在37℃、5%CO₂条件下进行原代培养；（2）宫膜干细胞的培养扩增：将步骤（1）获得的原代细胞以0.5×10⁶‑1.5×10⁶个细胞/cm²的密度接种于二维培养器皿中，加入新鲜细胞培养液，于37℃、5%CO₂条件下培养，3天换液；（3）宫膜干细胞的大规模培养：将步骤（2）获得的宫膜干细胞接种在转瓶或生物反应器中，调整溶解氧浓度、pH值、搅拌转速和通气量，根据取样分析细胞计数、存活率、营养成分和代谢物的结果更换培养基，从而达到细胞的高密度大规模培养；（4）宫膜干细胞的检测：进行干细胞特性、无菌性、支原体、衣原体检测；（5）宫膜干细胞的冷冻保存:将检测合格的细胞冻存于管内，细胞的详细信息扫描入数据管理系统，自动化系统根据液氮情况自动寻找空缺位置，将细胞冻存于相应的空格中；（6）根据需要，进行长期冷冻保存，并定期从冻存环境中取出细胞进行复苏检测。