[发明专利]一种枸杞子总黄酮的提取纯化工艺、检测方法及其应用

摘要

本发明属于枸杞子总黄酮的提取纯化制备方法和检测方法及其应用。目前，制备枸杞黄酮的方法有回流提取法、超声波提取法、微波提取法，公开专利201010542616.3枸杞叶中黄酮的提取制备方法中，采用胶体磨合技术和高压匀质技术及膜分离联合应用技术，繁复，耗时长。本发明目的是研制一种枸杞子总黄酮的提取纯化工艺、检测方法及其应用。本发明技术方案：提取工艺是枸杞子烘干粉碎、加乙醇，提取合并滤液、浓缩、萃取、得到枸杞子黄酮粗提液；提取纯化工艺：采用大孔树脂D101，对粗提液进行纯化，采用聚酰胺对黄酮进一步的纯化。本发明效果：在获得多糖的同时提取总黄酮，更充分的提取了枸杞子的有效成分；为大规模工业化生产打下基础。

主权项

一种枸杞子总黄酮的提取纯化工艺，其特征是：提取工艺：枸杞子于65℃烘干粉碎后，称取30kg于提取罐，加入300L浓度为80％的乙醇，于温度为60℃～100℃提取2次，每次0.5h～2h，合并滤液，经浓缩过滤后定容到120L，加入3倍浓度为95％乙醇静置24小时后抽滤并将溶液浓缩至120L，将浓缩得到的溶液与石油醚按比例为1∶2的进行萃取2‑3次，弃去石油醚层，得到枸杞子总黄酮粗提液；提取纯化工艺：(1)采用大孔树脂D101，对粗提液进行纯化：提前将大孔树脂用浓度为95％乙醇浸泡1d后，进行装柱，用蒸馏水洗至无醇味，将所得到的120L枸杞子总黄酮粗提液上样，上样流速为0.5～1.0ml/min，上样结束后用蒸馏水洗脱到无色，采用Molish反应进行清洗终点的判断，其判断方法为吸取1ml清洗液，加5％α‑萘酚乙醇溶液3滴，摇匀，沿试管壁缓缓加入0.5ml浓硫酸，如在试液与浓硫酸的交界面处很快形成紫色环，表明还有糖类物质的存在。判断后，以Molish反应阴性作为清洗终点，再用浓度为50％乙醇进行洗脱，采用盐酸‑镁粉反应进行洗脱终点的判断。判断方法是取洗脱液1ml，加少许镁粉振摇后，滴加5～6滴浓盐酸，1～2min内即可显橙红～紫红色，判断后以盐酸‑镁粉反应阴性为洗脱终点，收集浓度为50％醇洗液，将其浓缩至第一步枸杞子黄酮纯化液60L；(2)采用聚酰胺对黄酮进一步的纯化：先进行聚酰胺的活化处理：将聚酰胺颗粒用95％乙醇浸泡24h，装柱，水洗至无醇味，然后用浓度为5％氢氧化钠3倍柱体积进行冲洗，然后用水洗至中性，在用浓度为5％柠檬酸3倍柱体积冲洗，然后用水洗至中性，待上样；将大孔树脂所得的60L第一步枸杞子总黄酮纯化液进行上样，所用聚酰胺的柱体积应大于上样液体，使上样液可以充分分散在聚酰胺中，24小时后，用蒸馏水进行冲洗除杂，以Molish反应进行清洗终点的判断，然后浓度为分别用20％、50％乙醇依次洗脱，20％乙醇洗脱液中主要为杂质，黄酮损失量较少，再用50％乙醇洗脱至盐酸‑镁粉反应为阴性，收集洗脱液，所得为具有清除自由基作用的枸杞子总黄酮80g。