[发明专利]一种提高彩色马蹄莲组织培养丛生芽增殖率的方法

摘要

本发明提供一种提高彩色马蹄莲组织培养丛生芽增殖率的方法，对彩色马蹄莲的规模化生产和繁殖以满足市场需要具有一定的技术指导作用，提高彩色马蹄莲丛生芽增殖率的培养步骤包括：A.外植体消毒；B丛生芽诱导；C.60Co γ射线辐射处理；D.丛生芽培养；E.生根培养；F.炼苗移栽。采用植物组织培养的方法结合辐射处理繁殖彩色马蹄莲，不仅不受外界条件的影响，四季皆可进行，降低生产成本，而且可以在短时间内形成大量的优良试管苗，进行规模化、工厂化生产，为彩色马蹄莲产业提供大量的植物材料。

主权项

一种提高彩色马蹄莲组织培养丛生芽增殖率的方法，其特征在于： A外植体消毒：选取直径约2cm的健康的彩色马蹄莲小种球，用2g/L多菌灵水溶液浸泡15min后，浅埋于经高压灭菌处理的湿润的细沙基质中，在光照3000lx、12h/d、(25±1)℃的条件下进行预培养，令种球萌发；7～10d后，选取芽长约1cm的种球，经表面消毒后接种。具体消毒方法为：用软毛刷将块茎刷洗干净，避免损伤顶芽，削去块茎表皮，在安利洗涤剂溶液中振荡20min，再用2g/L多菌灵溶液浸泡1h，自来水冲洗40min，转入超净台，切除块茎表层，保留直径约1.5cm的带芽块茎，75％酒精浸泡15s，无菌水冲洗1次，而后以0.2％的升汞消毒15～20min。处理完毕后，无菌水冲洗6～8次，无菌吸水纸吸干水分； B芽诱导培养：将消毒好的彩色马蹄莲种球切成直径约1cm的带芽小块，接种至下列培养基中：MS基本培养基，蔗糖30g/L，生长激素0.1～0.2mg/L，细胞分裂素0.4～0.5mg/L，pH5.8；在培养温度25±1℃，光照强度为1000～3000lx，光照时间为12～16h下进行光照培养20～30天至分化出芽； C 60Coγ射线辐射处理：将继代生长20d的丛生芽(连瓶)于 60Coγ射线下进行40Gy，0.5h辐射照射，生长恢复10d后接种到以下培养基中：MS基本培养基，蔗糖30g/L，植物生长激素0.1～0.2mg/L，细胞分裂素0.4～0.5mg/L，pH5.8；培养温度25±1℃，光照强度为2000～3000lx，光照时间为12～16h，进行光照培养25～30天。30d后继续继代培养，使丛生芽增殖； D生根培养：选取健壮的试管苗，经过修剪后，接种到如下培养基中：MS基本培养基，蔗糖30g/L，植物生长激素1.0～2.0mg/L，细胞分裂素0.15～0.2mg/L，pH5.8；培养温度25±1℃，光照强度为1000～3000lx，光照时间为10～16h，进行光照培养20～30天至成苗； E炼苗移栽：将组培瓶从培养室取出，在缓冲间将瓶盖打开，进行有菌条件驯化3～5d；后用镊子将组培苗从瓶中取出，用500～800倍多菌灵浸泡20min左右，洗净后移栽到基质(泥炭土∶珍珠岩∶沙＝2∶2∶1)中进行栽培。