[发明专利]一株产莽草酸的大肠杆菌重组菌及其构建方法及应用

摘要

一株产莽草酸的大肠杆菌重组菌及其构建方法及应用，属于微生物基因工程技术领域。本发明首先利用分子生物学技术删除了大肠杆菌CICIMB0013的莽草酸激酶I基因（aroK）、莽草酸激酶II基因（aroL），以及葡萄糖磷酸转移酶系统的关键蛋白EIIBCGlc的基因（ptsG）和圭尼酸/莽草酸脱氢酶基因（ydiB），获得了大肠杆菌突变株CICIMB0013·SA4（△aroK,△aroL,△ptsG,△ydiB）。本发明还构建了含有莽草酸代谢途径中关键基因aroG*，ppsA，tktA的重组表达质粒pTHGAA，然后将重组表达质粒pTHGAA电转入重组菌CICIMB0013·SA4中，获得高效生产莽草酸的重组菌大肠杆菌B0013（SA4/pTHGAA）。本发明的大肠杆菌重组菌能够实现发酵过程中莽草酸的高效累积。

主权项

一株产莽草酸的大肠杆菌重组菌株，其分类命名为大肠杆菌（Escherichia coli）B0013（SA4/pTHGAA），该重组菌株染色体DNA中有4个基因被删除，同时有1~3个基因过量表达；删除的基因为：莽草酸激酶I基因aroK，莽草酸激酶II基因aroL，葡萄糖磷酸转移酶系统的关键蛋白EIIBCGlc基因ptsG和圭尼酸/莽草酸脱氢酶基因ydiB；过量表达的基因是：3‑脱氧‑D‑阿拉伯庚酮糖‑7‑磷酸合成酶基因aroG*，转酮酶A基因tktA，磷酸烯醇式丙酮酸合成酶A基因ppsA中的1~3个。