[发明专利]薄壳山核桃组培芽微型嫁接方法

摘要

一种薄壳山核桃组培芽微型嫁接方法，按如下四大步骤进行：一是接穗组培芽的诱导与增殖，经外植体采集与消毒、不定芽诱导培养基的配制、不定芽诱导、不定芽增殖培养基的配制和不定芽增殖培养五个工作环节。二是薄壳山核桃砧木的培育，三是组培芽的嫁接，四是嫁接和愈合期的管理。用本方法培育薄壳山核桃，具有保持母本特性、结果早、抗逆性强、繁殖速率高等优点。

主权项

一种薄壳山核桃组培芽微型嫁接方法，其特征是按如下步骤进行：一、接穗组培芽诱导与增殖；(1)外植体采集与消毒：选取健壮的薄壳山核桃优株1年生健壮新枝，依次进行自来水冲洗2h，超净工作台上用75％乙醇灭菌3min，无菌水冲洗3～4次，浓度为0.525％的NaClO灭苗20min并抽真空，无菌水冲洗5次后，用灭菌滤纸吸干表面水分，切下带顶芽和腋芽长度为1～1.5cm的枝段待用；(2)不定芽诱导培养基的配制：WPM附加蔗糖20～30g/L、琼脂A 6.5～8.5g/L、6‑BA即6‑氨基腺嘌呤0.5～2.0mg/L，IBA即吲哚丁酸0.1～0.5mg/L，pH值5.7；(3)不定芽诱导：将初代培养后胚根发育良好的幼芽接入前述(2)的不定芽诱导培养基中，经过21d的诱导，获得不定芽；用微电脑时控开关控制培养室每日光照时间，每日光暗周期为光16h/暗8h，光照强度为40～50μmol m‑2s‑1，培养温度为25±2℃；(4)不定芽增殖培养基的配制：WPM附加蔗糖20～30g/L、琼脂A 6.5～8.5g/L、6‑BA即6‑氨基腺嘌呤1.0～3.0mg/L，IBA即吲哚丁酸0.05～0.1mg/L，pH值5.7；(5)不定芽增殖培养：将获得的不定芽在前述(4)的不定芽增殖培养基上进行增殖培养，21天继代1次，共继代3次， 增殖系数为5～8；光照培养，光暗周期为光16h/暗8h，光照强度为40～50μmol m‑2s‑1，培养温度为25±2℃；二、薄壳山核桃砧木培育：选择当年充分成熟的薄壳山核桃作砧木种子，在大棚中设置苗床，苗床长度与宽度分别为1m和10m，苗床底部按每平方米100W的标准布地热线，温度由控温仪控制；用1000mg/L浓度的赤霉素浸泡种子2～3天，捞出后直接将种子摆放在苗床上，薄壳山核桃缝合线与土表垂直，每平方米摆放700～800粒、于薄壳山核桃上覆沙土8～10cm，浇透水再覆地膜，控制温度在25±2℃；三、组培芽嫁接：于大棚中从苗床取出18～20cm高的种子苗做砧木，在子叶着生处以上2～3cm处剪断砧苗，沿髓心稍偏纵切，深1cm；剪下3.0～3.5cm长的健壮组培芽，插入砧木的纵切口，用0.5cm＊10cm的微膜包扎，并移栽植于育苗容器中，在育苗容器外罩透明塑料袋保湿；一周后，逐渐剪开透明塑料袋的袋角，直至全部剪开并去除套袋；四、管理：嫁接后，接穗和砧木愈合期大棚温度控制在25±2℃，湿度控制在85％±2％，避免阳光直射，直至接穗和砧木完全愈合，嫁接苗成活。