[发明专利]一种核酸适配体用于肿瘤细胞高灵敏检测的电极修饰方法

摘要

本发明公开了一种核酸适配体用于肿瘤细胞高灵敏检测的电极修饰方法，将肝癌细胞BNL1MEA.7R.1(MEAR)特异的核酸适配体TLS1c和TLS11a共价修饰到电极表面，利用循环伏安法、差分脉冲伏安法及交流阻抗法对MEAR细胞进行检测，在1mL1*109血细胞中，可以实现对单个MEAR细胞的痕量检测。采用本发明技术方案，可以显著的降低背景值和检测限，提高电化学检测肿瘤细胞的灵敏度。

主权项

一种核酸适配体用于肿瘤细胞高灵敏检测的电极修饰方法，包括以下步骤：步骤1）电极表面的修饰玻碳电极依次用1μm,0.05μm三氧化二铝粉末打磨，去除掉表面杂质，然后分别在1:1HNO3，丙酮，和双蒸水超声2分钟；将电极在0.085mol/L K2Cr2O7和1.7mol/L HNO3溶液中，用1.5V恒电位氧化30s生成表面羧基；将氧化好的玻碳电极浸入含有0.02mol/L EDC和0.01mol/L NHS的0.02mol/L PBS(pH=6.8)溶液中，在室温活化30分钟；将20μL 0.5*10‑5mol/L 15T‑TLS1c（TTTTTTTTTTTTTTTACAGGAGTGATGGTTGTTATCTGGCCTCAGAGGTTCTCGGGTGTGGTCACTCCTG）和10μL 1*10‑5mol/L oligo dA的混合溶液，以及20μL 0.5*10‑5mol/L 15T‑TLS11a  (ACAGCATCCCCATGTGAACAATCGCATTGTGATTGTTACGGTTTCCGCCTCATGGACGTGCTG)溶液，分别在95℃变性5分钟，然后逐渐冷却至室温，形成正确的二级结构；将变性‑复性好的核酸适配体滴加到活化的电极表面，室温干燥；用0.02mol/L PBS(pH=6.8)溶液清洗电极表面，去除未共价结合的核酸适配体；修饰好的电极保存在TE缓冲溶液中备用；步骤2）实验样品的处理取1mL健康人的血液，4000rpm离心15min,去除血浆；用0.02 mol/L PBS(pH=7.0)洗涤血细胞三次；用1 mL 0.02 mol/L PBS(pH=7.0)重新悬浮血细胞；步骤3）电极的封闭将修饰好的电极在血细胞中4℃孵育45min；步骤4）肿瘤细胞的检测向血液中逐渐加入BNL 1ME A.7R.1(MEAR)细胞，修饰好的电极和MEAR细胞在4℃反应15min，用循环伏安、差速脉冲伏安、交流阻抗的方法检测肿瘤细胞。