[发明专利]单克隆抗体间接免疫荧光检测附红细胞体病的方法

摘要

本发明公开了一种单克隆抗体间接免疫荧光检测附红细胞体病的方法，包括标准阳性对照和阴性对照的设立，抗原包被，荧光二抗的稀释，IFA测定等步骤。采用的抗体是抗猪附红细胞体的单克隆抗体，相对于IHA、ELISA等其他检测方法所用的一般的抗体而言，其特异性高、敏感性强，准确性可靠性大；能快速、简便、可靠、准确的检测出样品中的附红细胞体，也可用于附红细胞体病的流行病学调查和疗效检测。

主权项

一种单克隆抗体间接免疫荧光检测附红细胞体病的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）标准阳性对照和阴性对照的设立，将自然感染率达90％以上，且经瑞氏、姬姆萨和吖啶橙染色检测均为阳性的猪血作为标准阳性抗原对照；将来自西藏地区且经压片、瑞氏、姬姆萨和吖啶橙染色及PCR检测均为阴性的猪血作为阴性对照；（2）抗原包被，取标准阳性和阴性血样涂片，晾干，并设空白对照；（3）荧光二抗的稀释，分别用0.01％ 的伊文思蓝和0.01 mol／L PBS稀释FITC标记的山羊抗鼠IgG抗体；（4）IFA测定，将已包被好的两组标准阳性和阴性对照的玻片，用冷丙酮和甲醛等比例混合液固定15 min，室温下干燥，加入相应编号的抗猪附红细胞体的单克隆抗体20 L，置湿盒中37℃下作用30 min，用PBS轻轻冲洗，然后浸泡于PBS盒中，于电动摇床上轻微摇动，连续洗涤3次，待免疫荧光片干燥后将其中一组标准阳性和阴性抗原及空白对照玻片中加入10 L用0．01％伊文思蓝稀释的荧光抗体；另一组加入10L用0．01mol／LPBS稀释的荧光抗体，置湿盒中37℃下作用30 min，用PBS轻轻冲洗，然后浸泡于PBS盒中，于电动摇床上轻微摇动，连续洗涤3次，待干燥后滴加甘油‑PBS缓冲液，覆加盖玻片，置荧光显微镜下观察。