[发明专利]一种用于定量检测FMDV有效抗原的反向液相阻断ELISA方法

摘要

本发明公开了一种用于定量检测FMDV有效抗原的反向液相阻断ELISA方法。本发明通过将标准阳性血清的稀释方法固定，即固定血清抗体的量，将待检抗原作系列稀释与之作用，同时设置已知有效抗原含量的标准对照抗原，基于阳性血清在某一恒定的抗体效价下其50%阻断有效抗原量是一定的这一抗原抗体反应原理，成功建立了一种对口蹄疫病毒有效抗原定量的新技术，命名为反向液相阻断ELISA。该方法继承了液相阻断ELISA方法用于测定血清抗体时可分型、操作简单、重复性好、高敏感性、高特异性、可批量检测等优点，同时实现了对FMDV的有效抗原量的定量测定，为解决现今国内外急需解决的疫苗效力检验动物替代问题提供了技术手段。

主权项

1.一种用于定量检测FMDV有效抗原的反向液相阻断ELISA方法，其特征在于通过将标准阳性血清的稀释方法固定以达到固定血清的量的目的，并将待检抗原作系列稀释与之作用，同时设置已知有效抗原含量的标准对照抗原，参考阳性标准血清在某一抗体效价下阻断50%标准对照抗原的有效抗原量的测定结果，基于标准阳性血清在某一恒定的抗体效价下其50%阻断有效抗原量是一定的这一抗原抗体反应原理，通过以下公式计算得到：其中，血清的具体抗体滴度按以下公式计算得到：血清抗体滴度D=1/2^n+s其中，n为略低于临界值的稀释滴度的连续稀释倍数的指数；临界值（OD_50%）:即标准对照抗原平均OD_492nm值的50%。