[发明专利]靶向TLR2的shRNA干扰载体PLK0.1-TLR2-shRNA构建及鉴定在审

专利信息
申请号: 201210563603.3 申请日: 2012-12-24
公开(公告)号: CN103882059A 公开(公告)日: 2014-06-25
发明(设计)人: 郑丽丽;杨艳菊 申请(专利权)人: 苏州中同生物科技有限公司
主分类号: C12N15/867 分类号: C12N15/867;C12N15/66
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 215101 江苏省苏州市吴中区木*** 国省代码: 江苏;32
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摘要: 发明公开了一种靶向TLR2的shRNA干扰载体PLKO.1-TLR2-shRNA构建及鉴定。根据Gene Bank中TLR2的cDNA序列,参考shRNA设计原则,选择cDNA序列上的四个部位作为目标序列,同时将选中的shRNA中的碱基序列随机打乱设计为阴性对照,对照序列经BLAST检测证实与TLR2mRNA及其他基因编码序列无同源性。shRNA模板中的loop结构选用了TTCAAGAGA以避免形成终止信号,shRNA的转录终止序列采用T6结构。正义链模板的5′端添加了CCGG,与Age I酶切后形成的粘端互补;反义链模板的5′端添加了AATTCAAAAA,与EcoR I酶切后形成的粘端互补。成功构建了靶向TLR2的shRNA干扰载体PLKO.1-TLR2-shRNA,并筛选出最佳抑制效率的干扰载体PLKO.1-TLR2-S3,为进一步研究探讨TLR2参与宿主炎症疾病的发病机制和防治具有重要意义。
搜索关键词: 靶向 tlr2 shrna 干扰 载体 plk0 构建 鉴定
【主权项】:
一种重组慢病毒质粒载体,其特征是该载体含有大鼠的TLR2的基因干扰片段。 
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