[发明专利]一种快速筛选微生物絮凝剂产生菌的方法

摘要

本发明提供的一种快速筛选微生物絮凝剂产生菌的方法，包括微生物的富集培养，取活性污泥水于烧杯中，静置沉淀10min，取上清液10ml，加入装有100ml灭菌的LB液体培养基或PDA液体培养基或高氏一号液体培养基的250ml三角瓶中，在28-37℃，200rpm摇床中培养，富集菌液浓度为1.0CFU/ml；优化发酵培养液的制备，将可溶性淀粉28-32g、K2HPO4 4-6g、KH2PO41.5-2.5g、酵母膏3-5g、KNO30.8-1.2g、NaCl0.4-0.6g、MgSO4·7H2O0.4-0.6g、FeSO40.008-0.013g依次放入950-1050ml蒸馏水的容器中，用NaOH调节pH7.5-8.5、温度110-115℃下灭菌25-30min，即得；还包括微生物的发酵培养，菌种的分离纯化，絮凝率的测定。

主权项

一种快速筛选微生物絮凝剂产生菌的方法，其特征在于：按步骤实施：步骤1微生物的富集培养：取活性污泥水于烧杯中，静置沉淀10min，取上清液10ml，加入装有100ml 灭菌的LB液体培养基或PDA液体培养基或高氏一号液体培养基的250ml三角瓶中，在28‑37℃，200rpm摇床中培养，富集菌液浓度为1.0CFU/ml；其中PDA液体培养基：取新鲜土豆去皮，切成约2cm2的小块，放入1500ml的烧杯中煮沸30min，然后用4层纱布过滤，取其滤液加葡萄糖20g，在用蒸馏水补足至1000ml， 121℃灭菌25min，得成品；其中高氏一号液体培养基：取可溶性淀粉20g、KNO3 1g、 NaCl 0.5g、K2HPO4·3H2O 0.5g、 MgSO4·7H2O 0.5g、 FeSO4·7H2O 0.01g，放入1000ml蒸馏水中，用NaOH调节pH 7.6，温度121℃以下，灭菌25min，得到；其中LB液体培养基：取蛋白胨10g、酵母浸粉5g、NaCl 5g，放入1000ml蒸馏水中，用NaOH调节pH 7.0，121℃下灭菌25min，得成品； 步骤2优化发酵培养液的制备:将可溶性淀粉28‑32g、K2HPO4  4‑6 g、KH2PO4 1.5‑2.5g、 酵母膏 3‑5g、KNO3 0.8‑1.2g、 NaCl 0.4‑0.6g、 MgSO4·7H2O 0.4‑0.6g、  FeSO4 0.008‑0.013g依次放入950‑1050ml蒸馏水的容器中，用NaOH调节pH 为7.5‑8.5、温度110‑115℃下灭菌25‑30min，得成品；步骤3微生物的发酵培养:将步骤1富集培养液按1‑2:100的接种量接入步骤2优化发酵培养液中培养，温度25‑30℃、时间30‑40h、摇床转速100‑200rpm; 培养液离心后取上清2ml，加入100ml废水，测定絮凝率；其絮凝剂主要成分是多糖，是菌种生长过程中的代谢分泌物；步骤4菌种的分离纯化:选高絮凝效果的发酵液用无菌水稀释，制成不同梯度的稀释菌液，取0.1ml各梯度的稀释菌液涂布在LB固体培养基、PDA固体培养基和高氏一号固体培养基上，在28‑37℃静置培养，待长出单菌落后，挑取单菌落再经28‑37℃、200rpm摇床培养，浓度达到1.0 CFU/ml后按1.5:100的接种量接入发酵培养液，25‑30℃，150rpm摇床培养30‑40h测定其絮凝率，结果得产生絮凝剂的菌株，絮凝率达80‑90%；步骤5絮凝率的测定方法：称取4g高岭土溶于1000ml蒸馏水中配置成4g/L的高岭土悬浮液，称取1g CaCl 溶于100ml蒸馏水中配置成1%的溶液；取100ml高岭土悬浮液于250ml烧杯中，用NaOH调节pH7.0，加入2ml 1%的CaCl溶液和2ml的发酵培养液，先快速搅拌2min再缓慢搅拌3min，静置10min后取上清液，用分光光度计在550nm处测定其吸光度，以加入发酵培养基的高岭土悬浮液做对照试验，絮凝率计算公式：絮凝率=（A‑B）/A×100%；其中A为对照上清液在550nm处的吸光度；B为加入发酵液的样品上清液在550nm处的吸光度。