[发明专利]一种制备丙氨酸转氨酶的方法及应用

摘要

本发明公开了一种制备丙氨酸转氨酶的方法，该方法包括：改造全基因合成人源化丙氨酸转氨酶编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子；将改造后的丙氨酸转氨酶编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达；将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导；所得菌体破菌，离心分离，过Ni-NTA柱纯化；本发明制备丙氨酸转氨酶操作非常简单，制备成本低，成品产率高，纯度高而且具有高生物活性，作为抗原物质可进行动物免疫，筛选相关抗体，同时为尽快建立国内临床化学诊断急需的校准品制备平台，研制诊断试剂标准物质和参考品奠定基础。

主权项

一种制备丙氨酸转氨酶的方法，其特征在于，该方法包括：1)改造并全基因合成人源化丙氨酸转氨酶编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子；2)将步骤1)中改造后的丙氨酸转氨酶编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达；3)将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导；4)所得菌体破菌，离心分离，过Ni‑NTA柱纯化；其中，步骤1)中改造后的全基因合成人源化丙氨酸转氨酶编码基因序列为：ATGGCTTCTT CTACTGGTGA TCGTTCTCAG GCTGTTCGTC ATGGTCTGCG TGCGAAAGTTCTGACCCTGG ACGGCATGAA CCCGCGTGTT CGTCGCGTCG AATACGCCGT GCGTGGCCCGATCGTTCAGC GTGCTCTGGA ACTGGAACAA GAACTGCGTC AGGGCGTTAA AAAGCCGTTCACCGAGGTTA TCCGCGCCAA CATCGGCGAT GCCCAGGCTA TGGGTCAGCG TCCTATCACCTTCCTGCGCC AGGTCCTGGC GCTGTGCGTA AACCCAGACC TGCTGAGCTC TCCGAACTTCCCGGACGACG CTAAGAAACG TGCGGAACGC ATCCTGCAGG CATGCGGTGG CCACAGCCTGGGCGCTTACA GCGTTTCCTC CGGTATCCAG CTGATTCGTG AAGATGTTGC CCGTTACATCGAGCGCCGTG ATGGCGGTAT CCCGGCGGAC CCTAACAACG TATTCCTGTC TACCGGTGCGTCCGATGCCA TTGTTACCGT TCTGAAGCTG CTGGTGGCTG GCGAGGGTCA CACCCGTACCGGTGTCCTGA TTCCGATTCC ACAGTATCCG CTGTATTCTG CTACTCTGGC TGAACTGGGTGCGGTGCAGG TAGACTATTA CCTGGATGAG GAGCGCGCTT GGGCGCTGGA CGTCGCAGAGCTGCACCGCG CACTGGGCCA GGCACGTGAC CACTGCCGTC CGCGTGCGCT GTGCGTGATTAACCCGGGCA ACCCGACGGG CCAAGTTCAG ACCCGTGAAT GCATCGAAGC TGTGATTCGTTTTGCTTTCG AAGAACGTCT GTTCCTGCTG GCGGACGAAG TTTATCAGGA CAACGTTTACGCAGCCGGTA GCCAGTTTCA TTCTTTCAAG AAAGTTCTGA TGGAAATGGG TCCGCCGTATGCGGGTCAGC AAGAACTGGC ATCCTTCCAC TCTACCTCCA AAGGTTATAT GGGTGAGTGTGGCTTCCGTG GTGGTTATGT TGAAGTAGTT AATATGGACG CGGCTGTGCA GCAGCAGATGCTGAAGCTGA TGTCTGTGCG CCTGTGCCCG CCTGTGCCGG GTCAAGCCCT GCTGGATCTGGTTGTGTCTC CGCCTGCTCC GACTGATCCG TCCTTCGCAC AATTCCAGGC TGAGAAACAGGCCGTTCTGG CGGAACTGGC AGCGAAAGCC AAACTGACGG AACAAGTGTT CAACGAAGCGCCGGGTATCT CCTGCAATCC GGTACAAGGC GCGATGTATA GCTTCCCGCG CGTTCAGCTGCCGCCACGCG CAGTAGAACG TGCACAGGAA CTGGGCCTGG CTCCGGACAT GTTCTTCTGTCTGCGCCTGC TGGAAGAAAC CGGTATTTGC GTTGTACCTG GCAGCGGCTT CGGTCAACGTGAAGGTACTT ACCACTTCCG TATGACCATC CTGCCTCCGC TGGAAAAACT GCGTCTGCTGCTGGAAAAGC TGTCCCGTTT TCACGCGAAA TTCACTCTGG AATATTCTTA G